马鹿属国家二级保护野生动物,鹿茸在药用、保健、美容等方面的功效十分显著,产品倍受青睐,是值得开发利用的资源之一。本研究以马鹿鹿茸为实验材料,对其解剖结构和鹿茸骨膜超微结构进行了观察,对生茸类干细胞进行了培养和鉴定,结果如下:1.鹿茸组织胶原纤维丰富,细胞数量少,分布不均匀,种类少,主要位于茸骨骨膜层,细胞呈长梭形,核质比高,核仁明显,个别为双核仁,细胞器少,符合成体干细胞的特征。2.建立了马鹿耳部皮肤成纤维细胞和马鹿生茸类干细胞的培养方法和培养体系。3.鹿茸类干细胞以hDMEM培养液效果较好,采用FCS与NCS 1:2混合培养效果较好,原代培养添加20%血清为宜,传代以10%为宜,添加FGF、雄激素、胰岛素生长因子有助于鹿茸细胞的生长,鹿茸细胞对接种密度较敏感,以106个/毫升为宜,太高或太低易引起细胞衰老和分化。4.鹿茸类干细胞具有贴壁生长特性,在原代培养早期,主要为宽大扁平的成纤维细胞样,生长密集时呈旋涡状或鸟巢状,传至第3代出现衰老,在体外培养条件下,能够自发分化为前成骨细胞和软骨细胞。5.鹿茸细胞采用常规细胞DMSO冻存法复苏贴壁率优于程序式冻胚仪冷冻法、乙二醇常规细胞冻存法。6.建立的鹿茸类干细胞系经AKP染色呈阳性,通过观察培养形态、电镜分析也已证明分离得到鹿茸类干细胞,完全符合干细胞鉴定特征。