【摘 要】
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目的:胰腺癌是消化道常见的恶性肿瘤之一,但因其恶性程度较高且易产生化疗耐药,预后极差。目前对于胰腺癌的治疗处于瓶颈期,亟待探索胰腺癌化疗耐受的可能机制。作为一种微小RNA,有研究表明miR-613在多种恶性肿瘤中存在异常表达并与其发生发展密切相关,但miR-613与胰腺癌细胞吉西他滨的耐受性还没有相关的研究。鉴于此,拟体外研究miR-613在耐吉西他滨胰腺癌细胞株的表达情况以探讨胰腺癌细胞耐药的可
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目的:胰腺癌是消化道常见的恶性肿瘤之一,但因其恶性程度较高且易产生化疗耐药,预后极差。目前对于胰腺癌的治疗处于瓶颈期,亟待探索胰腺癌化疗耐受的可能机制。作为一种微小RNA,有研究表明miR-613在多种恶性肿瘤中存在异常表达并与其发生发展密切相关,但miR-613与胰腺癌细胞吉西他滨的耐受性还没有相关的研究。鉴于此,拟体外研究miR-613在耐吉西他滨胰腺癌细胞株的表达情况以探讨胰腺癌细胞耐药的可能机制。方法:1.培养胰腺癌PANC-1细胞,运用不同浓度梯度吉西他滨处理胰腺癌细胞。首先使用3ng/ml的盐酸吉西他滨对胰腺癌细胞进行培养,待细胞对低浓度吉西他滨药物产生一定的耐药性后,逐步提升培养基中的吉西他滨浓度,分别以1Ong/ml、50ng/ml、100ng/ml、300ng/ml、600ng/ml盐酸吉西他滨浓度的培养,历时24周,直到细胞能够在含有600ng/ml盐酸吉西他滨的DMEM培养基中稳定生长3天,命名该细胞株为PANC-1/GEM。测得到 PANC-1 细胞及 PANC-1/GEM 细胞的 IC50,并以 PANC-1 的IC50所对应药物浓度处理后续实验细胞。2.运用实时定量PCR法（qRT-PCR）检测PANC-1细胞中的miR-613表达情况,将miR-613过表达后,运用CCK-8、划痕实验、Transwell侵袭实验分别检测细胞的增殖能力、迁移能力、侵袭能力,运用流式细胞仪测定细胞凋亡水平,蛋白印迹测定相关抗凋亡蛋白表达情况;将miR-613敲除后仍采用上述方法检测细胞功能相关变化并明确miR-613在胰腺癌细胞中的作用。通过低浓度吉西他滨诱导胰腺癌PANC-1细胞并成功获得耐药株（PANC-1/GEM）,qRT-PCR检测miR-613表达情况,并运用CCK-8实验检测细胞增殖活性,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,流式细胞仪评估凋亡水平,蛋白印迹检测抗凋亡蛋白表达水平,将miR-613过表达后同上述方法再次检测细胞功能变化情况。结果:在未经药物处理的胰腺癌PANC-1细胞株中,miR-613表达下调,IC50为37.09ng/ml。将miR-613过表达后胰腺癌细胞IC50下降至24.08ng/ml。过表达miR-613后PANC-1细胞对吉西他滨敏感度增加、细胞增殖能力减弱、水平迁移能力下降、侵袭能力减弱,但细胞凋亡增加,抗凋亡蛋白表达下降。将miR-613敲除后发现胰腺癌细胞IC50上升至62.53ng/ml。转染后PANC-1细胞对吉西他滨化疗敏感度降低、细胞增殖能力、水平迁移能力、侵袭能力增强,但细胞凋亡减少、抗凋亡蛋白表达上调。对于吉西他滨耐药株,其IC50为338.3ng/ml,与PANC-1细胞相比,miR-613过表达后PANC-1/GEM细胞IC50为56.06ng/ml,对吉西他滨敏感度增加,可恢复至非耐药水平,与NC组相比细胞增殖、迁移、侵袭能力下降,凋亡增加。结论:miR-613可能是胰腺癌细胞耐吉西他滨的其中机制之一。miR-613可能作为一个潜在的治疗靶点来逆转胰腺癌的化疗耐受。
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