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外泌体(Exosome)是一种细胞外囊泡,可有效保护其内在物质活性,实现生理与病理状态下物质的运输,参与了失血性休克引起的器官功能障碍和结构损伤;失血性休克肠淋巴液(PHSML)携带的外泌体回流至体循环是导致急性肺损伤(ALI)的关键环节之一。因此,寻找针对PHSML外泌体的防治措施,对于减轻失血性休克后的组织器官损伤、降低病亡率,具有积极的现实意义。星状神经节阻滞(SGB)已广泛应用于疼痛的治疗,并逐渐向其它疾病拓展。我室实验研究表明SGB可延长重症失血性休克大鼠的存活时间,改善肠屏障功能,减轻ALI,但详细机制还不十分清楚。SGB减轻失血性休克后ALI的作用是否与PHSML中携带的外泌体有关?未见报道。据此猜想,SGB通过影响PHSML中分泌外泌体的数量与活性,进而减轻了失血性休克引起的ALI。为了验证这一假说,本实验在建立淋巴液外泌体分离技术的基础上,观察SGB对PHSML中外泌体数量的作用,并从整体动物实验与细胞实验水平,观察PHSML中外泌体对肺组织与肺微血管内皮细胞(PMVECs)的直接损伤作用,进而明确PHSML中外泌体在SGB减轻失血性休克后ALI中的作用,为防治失血性休克导致的ALI提供实验资料。首先,观察SGB对PHSML中外泌体数量的影响。在星状神经节(SG)局部注射罗哌卡因注射液建立SGB技术;提取肠淋巴液中外泌体,应用纳米粒径分析技术、CD63蛋白表达进行鉴定,证实本实验提取淋巴液外泌体是成功的。随后,将24只雄性大鼠随机均分为:假手术组(Sham)、Sham+SGB组、休克组(Shock)、Shock+SGB组,常规方法建立失血性休克模型,引流PHSML,提取外泌体,通过流式细胞术分析外泌体数量,结果发现,PHSML外泌体数量显著增加,SGB减少了失血性休克大鼠PHSML外泌体的数量。进一步通过流式细胞术和Western blot方法检测外泌体Ep CAM的蛋白表达,结果显示,各组大鼠PHSML中的外泌体均表达肠道上皮细胞的特异性蛋白,表明肠淋巴液中的外泌体来自于肠道上皮细胞。其次,观察SGB处理PHSML中外泌体对大鼠肺组织结构的作用。36只雄性大鼠随机分为Sham组(n=12)、Sham+SGB组(n=6)、Shock组(n=12)、Shock+SGB组(n=6),按前述方法引流PHSML,提取外泌体。随后,取24只正常大鼠均随机分为4组(n=6),每组大鼠回输不同处理后PHSML中提取的外泌体:回输Sham组外泌体(Exo-Sham)、回输Sham+SGB组外泌体(Exo-(Sham+SGB))、回输Shock组外泌体(Exo-Shock)、回输Shock+SGB组外泌体(Exo-(Shock+SGB));取12只大鼠随机分为2组(n=6),常规方法建立失血性休克大鼠模型并实施SGB(Shock+SGB),分别回输Sham组外泌体(Shock+SGB+ExoSham)、回输Shock组外泌体(Shock+SGB+Exo-Shock)。所有大鼠在低血压60 min、液体复苏并回输外泌体结束后3 h或相应时间点,留取肺组织,观察肺组织形态学变化、肺组织湿/干比(W/D),用以反映SGB对PHSML中外泌体活性的影响。结果发现,Exo-Sham组和Exo-(Sham+SGB)组在肺组织学评分、W/D均无明显差异;Exo-Shock组肺组织学评分、W/D显著高于Exo-Sham组;Exo-(Shock+SGB)组肺组织学评分、W/D显著低于Exo-Shock组;Shock+SGB+Exo-Shock组肺组织学评分、W/D显著高于Shock+SGB+Exo-Sham组。最后,观察SGB对PHSML中的外泌体损伤大鼠PMVECs的作用。首先进行原代PMVECs培养,应用流式细胞术检测CD31抗体表达,鉴定为PMVECs。然后,将来自假手术组的肠淋巴液(Lymph-Sham)与提取的外泌体(Exo-Sham)、失血性休克组的肠淋巴液(Lymph-Shock)与提取的外泌体(Exo-Shock)分别作用于PMVECs,应用CCK8法检测PMVECs增殖活力的变化。结果发现,Lymph-Shock、Exo-Shock均显著降低了PMVECs增殖活力。进一步将Exo-Sham、Exo-(Sham+SGB)、Exo-Shock、Exo-(Shock+SGB)分别作用于PMVECs,观察PMVECs增殖活力的变化。结果显示,Exo-Shock组PMVECs增殖活力显著低于Exo-Sham组,Exo-(Shock+SGB)作用组PMVECs增殖活力显著高于Exo-Shock组。上述研究结果表明,SGB显著降低了PHSML中外泌体的数量以及对组织和细胞的损伤作用,外泌体是SGB减轻PHSML介导ALI的重要载体。