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牛至(Origanum vulgareL.)为唇形科(Labiate)牛至属(Origanum)多年生草本植物,生长于我国大部分省区,并被作为民间药物广泛使用。迄今为止牛至次生代谢物研究主要集中于挥发油的化学成分、药理作用及应用,而对非挥发性代谢物的研究相对并不系统。针对此现状,本论文运用色谱-核磁-质谱(LC-DAD-SPE-NMR-MS)联用技术,对产于湖北省团风县的牛至中非挥发性次生代谢物展开了较系统的研究。
首先,本论文采用LC-DAD-SPE-NMR-MS联用技术,对不同月份牛至的花序、叶、茎与根茎等器官中次生代谢物进行了分析,通过对1H NMR与1H-1H COSY、1H-1HTOCSY、1H-13C HSQC、1H-13C HMBC等二维NMR谱的分析,鉴定出26种代谢物。在这些鉴定出的代谢物中,包括13种首次发现的新代谢物,其中还包括首次在自然界中发现的两类新颖骨架的代谢物。牛至素A-E等5种代谢物具有不饱和双环七原子的核心骨架,这是在牛至植物中首次发现的一类新颖骨架类型代谢物。牛至草素A-C等3种代谢物具有四羧基、一苯基取代的环己烯核心骨架,这是牛至植物中首次发现的又一类新颖骨架类型代谢物。牛至酸与异牛至酸为牛至植物中首次发现的牛至苷类新代谢物。异丹酚酸P、丹酚酸R、丹酚酸S等三种咖啡酸衍生物为牛至植物中首次发现的新代谢物。此外,本论文首次在牛至植物中鉴定出原紫草酸、风轮菜酸E、顺式紫草酸、异丹酚酸C等4种已知次生代谢物。牛至植物中这些代谢物的发现让我们对牛至次生代谢物有了较全面的认识。
其次,本论文在LC-DAD-SPE-NMR-MS实验的基础上,对不同月份牛至的花序、叶、茎与根茎等器官中粗提物LC-MS分析中48个色谱质谱峰进行了指认。通过对牛至苷B、牛至苷、牛至酸等牛至苷类代谢物的质谱裂解途径进行分析,本论文总结出这类代谢物的质谱裂解规律,并运用该规律鉴定出牛至中含量较低的牛至苷B4′-O葡萄糖苷、牛至苷B3′-O-葡萄糖苷、牛至苷D、牛至苷E等4种新代谢物。通过对咖啡酸多聚体类代谢物的质谱裂解途径分析,本论文鉴定出牛至中含量较低的迷迭香酸3(或4)-O-葡萄糖苷、迷迭香酸3′(或4′)-O-葡萄糖苷、3(或4)-甲氧基迷迭香酸、3″(或4″)-甲氧基紫草酸、丹酚酸P与丹酚酸T等代谢物,这些代谢物均为牛至中首次发现的代谢物。同时,本论文对紫草酸、表紫草酸、顺式紫草酸、异丹酚酸P与风轮菜酸E等5种咖啡酸三聚体的质谱裂解途径进行了分析,推测出一种新的咖啡酸三聚体丹酚酸T,并推测牛至中可能还在两种结构未知咖啡酸三聚体。本论文还对牛至素类代谢物的二级质谱裂解途径进行了分析,推测牛至素类代谢物可能与迷迭香酸的代谢有一定关系。本论文进一步对牛至中含量较低的代谢物进行了鉴定,进一步加深了对牛至次生代谢物的认识。
最后,本论文对不同月份牛至叶、花序、茎与根茎等器官中主要代谢物含量随季节变化的规律进行了分析。结果表明:叶中代谢物种类与含量最为丰富,主要代谢物为牛至苷、黄酮、咖啡酸多聚体等类代谢物,而根茎中主要含有以紫草酸为主的咖啡酸多聚体类代谢物。此外,本论文利用质谱技术在牛至茎提取物中检测出新代谢物对羟基肉桂酰赤(或苏)酮酸,发现茎中此代谢物随生长季节变化含量逐渐降低,推测此代谢物与牛至生长发育有一定关系。
本论文采用现代分析技术LC-DAD-SPE-NMR-MS对不同月份、不同器官中牛至次生代谢物进行了较系统的鉴定,突破了传统植物代谢物研究中存在的一些问题,对不同生长阶段的牛至植物中代谢物进行了较系统地鉴定,还得到牛至不同器官中主要代谢物含量随生长季节变化规律,进一步加深了对牛至次生代谢物的认识。