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晚疫病菌通过释放效应子进入植物体内来调节植物的免疫应答反应,从而帮助病原菌更易侵染寄主植物。基因组测序发现晚疫病菌中至少含有500多个具有RxLR-dEER保守结构域的效应子。本实验在前期晚疫病效应子研究基础上,选取了其中11个效应子,运用农杆菌介导的瞬时表达系统在本氏烟上对这些效应子的基础功能进行鉴定。首先对效应子的表达模式进行了检测,并对效应蛋白在植物体内的表达情况进行了验证,对效应蛋白的亚细胞定位进行了观察,然后进行接种鉴定确认效应子是否对病原菌侵染及扩展有影响,最后通过效应子与PTI及ETI途径激发物的共注射了解这些效应子是否会抑制激发物诱导的HR反应。得到的主要结果如下: 1.在本氏烟上接种晚疫病菌优势菌株“88069”后,在病菌侵染后0,24,48和72h对效应子的表达水平进行检测,结果显示11个效应子均在侵染早期显著上调表达。 2.通过Western-blot确认效应蛋白瞬时表达载体的有效性。在本氏烟叶片注射1d后取样,提取蛋白后进行Western-blot,结果显示11个蛋白都可以正常表达,条带大小与预测一致。 3.为了确定效应子的亚细胞定位,在信号肽切除位点的上游融合了GFP标签。通过在本氏烟上的瞬时表达,结果显示四个效应子Pi08278,Pi15972,Pi19617和Pi07555定位在细胞质中;Pi16195,Pi17063和Pi00582定位在细胞膜上;Pi07550和Pi21388定位在细胞核和核仁中;Pi09732定位在细胞膜和类细胞骨架上。 4.为了确认这些效应子是否会促进晚疫病菌的侵染及扩展,在本氏烟上进行了接种鉴定,结果显示Pi15972,Pi19617,Pi16195和Pi09732显著地促进了晚疫病菌的侵染及扩展;Pi08278,Pi17063,Pi00582,Pi07550,Pi21388和Pi01934对晚疫病菌的侵染及扩展无影响;而Pi07555抑制病菌的扩展。 5.将效应子与PTI途径激发物INF1和XEG1,ETI途径的激发物Avr3a/R3a和Avr4/Cf4共注射后,对其诱导产生的HR进行了统计,11个效应子中没有发现可以抑制INF1,XEG1,Avr3a/R3a和Avr4/Cf4诱发HR的效应子。