论文部分内容阅读
目的：探讨重组人纤维连接蛋白(RetroNectin,RN)诱导的DC-CIK细胞生物学特性以及对K562细胞杀伤活性的影响,以建立一种高效、简便、杀瘤活性强的DC-CIK细胞培养方法。方法：通过分离健康人外周血单个核细胞,经DC-CIK条件培养基诱导培养获得大量的DC-CIK细胞,将其分为空白组、对照组和实验组,空白组不加入RN和DC-CIK条件培养基(PBMCs组),对照组不加入RN(DC-CIK组),实验组加入RN(RN-DC-CIK组),在倒置显微镜下观察细胞动态增殖情况及细胞形态变化,采用流式细胞仪检测其免疫表型,Annexin V-FITC检测细胞的凋亡情况。应用CCK-8试剂盒分别检测两组细胞在不同效靶比时对K562细胞的杀伤活性,采用酶联免疫法(ELISA)检测K562/DC-CIK组K562/RN-DC-CIK组细胞IFN-γ、IL-18分泌水平。采用实时定量多聚酶链式反应(RT-PCR)检测细胞中miRNA-21表达情况。结果：1.RN-DC-CIK组细胞生长增殖速度显著快于DC-CIK组2倍～3.5倍,从第7天到第14天,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。两组中的DC-CIK细胞成熟标志物D3+CD56+、CD86的表达随着培养时间的延长而增加,但两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。DC-CIK组细胞凋亡率为5.44±1.11%,RN-DC-CIK组细胞凋亡率为1.81±0.46%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。2.随着效靶比的增加,各组效应细胞对K562细胞的杀伤活性也增加,差异有统计学意义(P<0.05)；同一效靶比下,RN-DC-CIK组细胞对K562细胞的杀伤率高于DC-CIK组,两组比较差异有统计学意义沪<0.05)。3.K562/RN-DC-CIK组细胞IFN-γ分泌量显著高于K562/DC-CIK组,K562/DC-CIK组细胞IL-18分泌量较K562/RN-DC-CIK组高,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。4.经qRT-PCR检测分析可知,与对照组相比,K562/RN-DC-CIK组细胞miRNA-21表达显著低于K562/DC-CIK组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论：1.用RetroNectin诱导可提高DC-CIK细胞的增殖速度及抗肿瘤的能力。2.用RetroNectin诱导可阻断miRNA-21的表达,可能为RetroNectin诱导DC-CIK细胞抗肿瘤活性增强的机制之一。