基于金纳米粒子组装的蛋白修饰的生物传感新方法

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组蛋白是真核生物体细胞中与DNA结合的碱性蛋白质。在转录调控中,组蛋白在修饰酶的作用下,在N,端会产生不同形式的修饰,如甲基化、乙酰化、磷酸化和ADP-核糖基化等,这些修饰能够调节染色质中重要的功能性结构,影响整个基因转录程序。组蛋白修饰调节基因表达作用的机制在表观遗传学的研究中,通常被称之为“组蛋白密码”。组蛋白修饰异常会引起遗传基因表达异常,导致各种疾病,如癌症、糖尿病、炎症、神经性疾病和心血管疾病等,因此组蛋白修饰水平的分析对化学治疗与预防有着重要的意义。本论文针对组蛋白修饰水平分析研究领域的一些热点难点,设计了组蛋白修饰水平的新型生物传感分析方法,主要包括了组蛋白修饰酶活性的分析和组蛋白乙酰化修饰位点的分析。1.基于金纳米粒子可控组装聚集设计了一种检测组蛋白修饰酶活性的新型生物传感方法。介导金纳米粒子聚集的抗体不需要做前处理,在免疫识别时亲和力强,提高了分析的灵敏度。用该方法分别检测了组蛋白甲基化转移酶(HMT)和乙酰化转移酶(HAT),并对相应的酶抑制剂做了筛选分析,其中甲基化转移酶作用的位点是组蛋白H3第四位赖氨酸(Lys4),乙酰化转移酶作用的位点是第十四位赖氨酸(Lys14)。该方法为酶活性检测与酶抑制剂筛选提供了一个简便、稳定、选择性好、灵敏度高的可视化检测平台。2.基于金纳米粒子可控组装设计了一种组蛋白乙酰化修饰检测的耦合增强拉曼散射生物传感新方法。该方法以金纳米粒子为表面增强拉曼散射(SERS)基底,表面修饰乙酰化组蛋白H3多肽为识别探针,对甲氧基苯硫酚(4-MTP)为拉曼标记物,制备了组蛋白乙酰化修饰检测的SERS纳米探针。通过紫外可见吸收光谱与动态光散射分析,证实了组蛋白乙酰化抗体可介导SERS纳米粒子发生可控组装与聚集,使SERS纳米探针间发生局域电场共振耦合,产生显著增强的SERS信号。基于此,通过待测抗原与SERS纳米探针对抗体的竞争性相互作用,设计了组蛋白乙酰化修饰检测的竞争免疫SERS生物传感方法。该法操作简便、快速、重现性好,且裸眼即能进行可视化鉴定。
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