运用高速逆流色谱分离芦荟中活性成分的研究

来源 :上海海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:newyidiyu
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高速逆流色谱(High-speed Countercurrent Chromatography,简称HSCCC),是上世纪80年代发展的一种新型的液-液分配技术。高速逆流色谱技术应用范围很广泛,由于其有足够多的两相溶剂体系可以选择,所以几乎可以应用到各级各类天然活性成分领域。同时,其洗脱方式也灵活多样,既可以是单一流动相,也可以是多种流动相。样品既可以是初提物,也可以是经过初步纯化的样品。进样量可以是几毫克,也可以是几克。   芦荟有着很多重要医用药用价值,但其化学成分相当的复杂。目前,人们得出的芦荟的药理生理活性都是针对多种组分共同作用而言的,然而起主要作用的只是其中的一类。要研究是哪一种活性物质的在起作用就必须对该物质进行纯化。芦荟苷是芦荟中的最为重要的生物活性成分之一,他们是医药及化妆品的天然原料,有着极其重要的研究利用价值。   本文就是以此为目的,旨在建立运用高速逆流色谱从库拉索芦荟中分离纯化芦荟苷的方法,并研究其在化妆品中的应用。   首先,运用选定的工艺条件:乙醇超声提取法,通过酸化、浸提、大孔吸附树脂吸附洗脱、冷冻干燥等流程,从芦荟皮中提取芦荟苷。芦荟苷纯度分别为芦荟苷A,22.7%和芦荟苷B,14.8%。   然后,采用高速逆流色谱法对芦荟苷初提物进行了进一步分离纯化。首先,比较了9种预选定的溶剂体系的分层时间、上下相体积比、样品分配系数情况,最终确定用V(氯仿)∶V(正丁醇)∶V(甲醇)∶V(水)=4∶0.28∶3∶2作为本研究分离芦荟苷的的溶剂体系,上相为固定相,下相为流动相。此后对用高速逆流色谱进行芦荟苷分离纯化的最佳操作工艺条件进行了研究。研究了主机转速、流动相流速、循环水浴温度以及上样浓度对分离纯化的影响,最终确定的最佳操作参数为转速870r/min正向洗脱、流动相流速2ml/min、管柱温度25℃、上样浓度6mg/ml、检测波长360nm。结果表明,在此操作条件下,芦荟苷的乙醇提取物能得到很好的分离。而且,图谱上的峰分离效果很好,清晰可见,没有“毛刺”。收集高速逆流色谱分离后的各峰流出液,先经薄层色谱分析,再经HPLC进行分析鉴定,结果显示组分Ⅰ芦荟苷A的纯度为96%,组分Ⅱ芦荟苷B的纯度为93%,组分Ⅲ的纯度为87%。   第三部分,对高速逆流色谱分离出来的组分Ⅲ进行红外光谱测试,核磁共振氢谱测试以及质谱测试。再分析、综合红外,核磁,质谱分析的结果后,推测出该物质的分子式为C37H51NO10,结构式为:   最后,本研究在前人研究芦荟的防晒、保湿功能的基础上,进一步探讨芦荟苷成分的防晒保湿性能。将提取的芦荟苷添加到化妆品中,检测其防晒性能、高湿环境中的保湿性能、以及低湿环境中的吸湿性能。结果显示芦荟苷的含量越高,防晒效果越好,当芦荟苷含量达到0.05mg/ml时,80%的紫外线可以被全部吸收;且在模拟的人体出汗情况下,紫外吸收没有红移或者蓝移现象,可以作为抗干扰的紫外吸收剂;芦荟苷具有较好的保湿吸湿性能并呈现一定的正向剂量效应关系。芦荟苷在高湿环境中的吸湿性能优于其在低湿环境中的保湿性能。在高湿环境中的吸湿性能可维持6小时,在低湿环境中的保湿性能可持续4小时。
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