【摘 要】
：
植物转基因操作中常用到组成型启动子自花椰菜花叶病毒（CaMV）35S启动子和光诱导型启动子1,5二磷酸核酮糖羧化酶（Rubisco）小亚基基因启动子（PrbcS）。使用通路克隆（Gateway）技术能快速构建表达载体,但目标基因组成型表达,目标蛋白定位在胞质中。本研究构建了一个Gateway技术入门质粒载体（pENTR*-PrbcS-*T-GFP）,该载体含有PrbcS和绿色荧光蛋白（GFP）报告
论文部分内容阅读
植物转基因操作中常用到组成型启动子自花椰菜花叶病毒（CaMV）35S启动子和光诱导型启动子1,5二磷酸核酮糖羧化酶（Rubisco）小亚基基因启动子（PrbcS）。使用通路克隆（Gateway）技术能快速构建表达载体,但目标基因组成型表达,目标蛋白定位在胞质中。本研究构建了一个Gateway技术入门质粒载体（pENTR*-PrbcS-*T-GFP）,该载体含有PrbcS和绿色荧光蛋白（GFP）报告基因。通过Gateway技术利用该载体可以快速构建目的基因的光诱导型植物表达载体,实现目的基因在植物叶片中高水平表达,目的基因表达受光强度调节,目的蛋白定位到叶绿体或细胞质中。为了验证该入门载体的应用价值,本研究利用该入门载体通过Gateway技术构建了两个报告基因GFP、GUS的植物表达载体pK2-35S-PrbcS-*T-GFP和pK2-35S-PrbcS-*T-GUS。同时利用连接酶技术构建了GFP、GUS基因组成型和诱导型植物表达载体:pPZP211-PrbcS-*T-GFP、pK2-35S-GFP、pPZP211-PrbcS-*T-GUS、pK2-35S-GUS,通过农杆菌介导转入烟草和天竺葵中,用显微镜观察愈伤组织的荧光,结果说明pK2-35S-PrbcS-*T-GFP转化植物组织后可实现GFP基因的正常表达。本研究利用GUS染色技术分析了转基因烟草叶片中GUS的表达水平,结果说明pK2-35S-PrbcS-*T-GUS转基因烟草叶片中GUS基因的表达水平可以达到诱导型表达水平,而组成型启动子很难实现目的基因在叶片中的高水平表达。对GFP和GUS定量分析结果说明pK2-35S-PrbcS-*T-GFP的转基因植物叶片中GFP的荧光强度与pPZP211-PrbcS-*T-GFP转基因植物相似,是pK2-35S-GFP转基因植物2～3倍;pK2-35S-PrbcS-*T-GUS转基因植物叶片中GUS的活性与pPZP211-PrbcS-*T-GUS转基因植物相似,是pK2-35S-GUS转基因植物1～2倍。由此可见,利用此入门质粒载体构建的植物表达载体能实现目的基因在植物叶片中的高水平表达。核酮糖单磷酸途径（RuMP）是甲基营养菌同化甲醛的主要途径,该途径的关键酶是6-磷酸己酮糖合成酶（HPS）和6-磷酸果糖异构酶（PHI）,最近研究表明在许多非甲基营养菌中也发现了HPS和PHI的同源基因,同源性搜索结果发现在大肠杆菌基因组中也有HPS和PHI同源序列。因此本研究用PCR方法从大肠杆菌基因组中扩增HPS和PHI同源序列,构建了大肠杆菌Ehps和Ephi基因原核表达载体pDEST17-Ehps和pDEST17-Ephi,表达和纯化重组蛋白,结果表明Ehps和Ephi的重组蛋白具有酶活性。构建了Ehps和Ephi基因的植物表达载体pK2-PrbcS-T-Ehps和pB2-PrbcS-T-Ephi,通过农杆菌介导转化拟南芥,获得Ehps和Ephi的转基因株系。丝氨酸羟甲基转移酶（SHMT）在甲基营养菌丝氨酸途径具有非常重要的作用。比较丝氨酸途径和植物的光呼吸途径后发现这两个途径有相似甚至是完全相同的反应步骤。推测植物光呼吸途径与甲基营养菌丝氨酸途径具有类似的功能,光呼吸途径SHMT是负责C1化合物同化作用的核心酶。因此本研究构建了线粒体型SHMT（shm）和细胞质型SHMT（smt）植物表达载体pB2-PrbcS-SHM和pK2-35S-SMT,通过农杆菌介导转化拟南芥,获得smt和shm的转基因株系。
其他文献
2021年6月4日,教育部办公厅发布《关于推广部分地方义务教育课后服务有关创新举措和典型经验的通知》。新学期开学以来,各学校统筹推进课后服务。经过粗浅的探索与思考,笔者认为:综合实践活动课程,最能积极落实"双减"政策。本文将课后服务中综合实践活动课程的特点、实施及作用三个方面,浅略地谈谈笔者对学校课后服务的认识。
被孢霉属（Mortierella）是目前国内外研究亚油酸（Linoleic Acid, LA）和γ-亚麻酸（γ-Linolenic, GLA）等多不饱和脂肪酸（Polyunsaturated fatty acids, PUFAs）合成的主要真菌,其中深黄被孢霉（Mortierella isabellina）是国内最具有潜力工业化生产PUFAs的丝状真菌。它只合成n-6途径的PUFAs,如LA和GL
本研究选取了目前关注较多的高温放线菌为研究材料。Thermobifida halotolerans YIM 90462T是云南大学省微生物研究所放线菌研究室2008年在云南省黑井盐矿分离并经多相分类研究确定的高温双歧菌属的一个新种。而高温双歧菌属一般都具有分泌木聚糖酶的能力,目前研究较透彻的是Thermobifida fuscaYX分泌的木聚糖酶,其中涉及到通过对其基因改造进而提高酶学活力方面的内
高温蛋白酶因其反应温度高、热稳定性好而在工业生产中被广泛应用。本文从来自云南腾冲热海热泉水样,分离得到一株产高温蛋白酶的菌株GSEY01.该菌株在2%酪蛋白琼脂固体培养基上能产生明显的蛋白水解圈,其水解圈直径/菌落直径比为0.6。该菌株最适生长温度为60℃,经16S rRNA基因序列分析表明,该菌株为土芽孢杆菌属（Geobacillus）的嗜热菌株。该菌株所产高温蛋白酶Pgsey可以通过超滤浓缩,
随着测绘科学技术的发展,人们对地形的表达已从二维空间转向三维空间,在此基础上产生的DEM产品技术,便是描述三维空间信息的表达方式之一;而研究区域大地水准面精化问题,则是大地测量学的一个重要科学任务;将DEM建模技术与区域大地水准面精化研究相结合,建立高精度的区域高程异常数字模型,从而内插出该区域内任何一点或一小片区域的高程异常值,并通过网络将空间信息动态地向社会发布,可以方便各类测绘用户获取所需的
蛇毒组分丰富、含有多种蛋白质、多肽、酶类和其他小分子物质,而且活性多样,是人类迄今为止研究最多,利用最多的动物毒素。目前发现蛇毒中含有神经毒、细胞毒、肌肉毒素、磷脂酶A2、凝血酶样酶、血小板聚集抑制因子、去整合素、C型凝集素样蛋白及神经生长因子等多种蛋白活性成分,其中多种成分被用做治疗疾病的药物。而其中的神经毒cobrotoxin、弱毒神经毒cobrotoxin b、c以及多个心脏毒cardiot
GPS是一种可以定时和测距的空间交会定点的导航系统,可向全球用户提供连续、实时、高精度的三维位置、三维速度和时间信息。随着GPS卫星定位技术的发展和美国GPS政策的调整。卫星定位技术已在全球范围内得到了迅猛而广泛的应用。目前GPS技术在大范围高精度测量控制网、城市控制网、工程控制网、测图控制网中起到了越来越重要的作用。目前,在GPS变形监测中,对垂直位移的监测精度难以满足要求,从而限制了GPS在变
现代高程测定的基础主要包括两个部分:一是水准网（点）;二是（似）大地水准面。采用“GPS+似大地水准面”的技术可以节约大量人力、财力和时间,获得点的高程时,其精度均匀一致,没有水准测量沿线逐站传递的积累误差;在海岛、山区等困难或甚至无法传递水准测量高程的区域,采用这一技术不仅可以快捷的测得高程,而且其成果和国家高程基准和高程系统是统一的、协调的。从测绘生产的应用而言,国家测绘局提供的全国似大地水准
我国在不同时期、不同部门间都有自己独立的地方基准（地方独立坐标系）,但随着“数字中国”、“数字城市”的发展,为了将原有的测绘资料统一到同一个基准下,必须将旧的坐标基准转换到新的坐标基准下,以实现测绘资料的“平稳过渡”,达到测绘数据的充分共享。在不同地方基准间的转换过程中,由于一般坐标基准点的数值位数较大,导致转换模型运算的有效数位不足或计算过程中约数误差较大,使模型的设计矩阵或信息矩阵在计算过程中
本文应用地质学、地质地貌学和旅游地质学理论等相关学科理论,采用野外考察和室内分析相结合的思路,对云南玉龙黎明高山丹霞地质景观的地学背景进行了系统的研究分析,并通过对比研究,初步总结了玉龙黎明高山丹霞地质景观的科学、美学和旅游价值。论文研究内容和取得的研究成果主要有以下几个方面：（1）玉龙黎明高山丹霞地质景观区内地层系统、构造变形系统地调查、分析,认为研究区所处的独特大地构造、地史演化和古地理位置,