PDIP1γ基因的克隆、表达及功能初步研究

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肿瘤坏死因子α(TNF-α)是一个多功能的细胞因子,在许多细胞生理过程中起重要作用,比如细胞凋亡,细胞增殖,B细胞激活,肝细胞的再生以及一些急性的细胞炎症反应等。人类的PDIP1(polymerasedelta-interactingprotein1)是一种受TNF-α和白介素6(IL-6)诱导的蛋白,并且能与增殖细胞核因子(PCNA)和DNA聚合酶的小亚基δ有相互作用。我们在GeneBank中搜索到在人类有两个与人类PDIP1基因具有较高同源性的基因,同样在GeneBank中也搜索到了在小鼠也有两个与小鼠PDIP1基因同源性较高的两个基因,它们在氨基酸序列高度保守,与PDIP1基因一样,在N端区域,都有一个BTB/POZ的结构域;而在C端区域,则是PCNA的结合基序(QTKV-EFP)。它们都受TNF-α的诱导,我们把它们归为PDIP1同一家族,由于人们对PDIP1家族各基因的功能不是很清楚,我们克隆了小鼠PDIP1γ基因,并在大肠杆菌中表达、纯化,获得了较纯的GST-PDIP1γ融合蛋白,进一步免疫新西兰兔,获得了滴度高、特异性好的小鼠PDIP1γ多克隆抗体。用Northern-Blot和Western-Blot分别从RNA和蛋白质水平得到了PDIP1γ在小鼠各组织的表达谱。同时我们克隆了人类PDIP1?基因,并用免疫共沉淀的方法,分析了人类PDIP1γ基因与周期蛋白依赖性激酶的抑制因子P21相互作用,为以后进一步研究PDIP1家族功能奠定了基础。
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