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目的:探讨乌司他丁在脂多糖诱导的RAW264.7细胞的保护作用及对mi R-21表达影响。方法:(1)用不同浓度(100,250,500 ng/m L)LPS刺激RAW264.7细胞,RT-PCR法检测mi R-21的表达、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)m RNA、白介素-6(interleukin-6,IL-6)m RNA的表达;(2)采用500ng/m L LPS刺激RAW264.7细胞6h、12h、24h,采用RT-PCR检测TNF-αm RNA;(3)四甲基偶氮唑(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测不同浓度(10,100,1000U/m L)UTI对RAW264.7细胞活性的影响;设置正常组、模型组(LPS 500ng/m L剌激组)、实验组(LPS 500ng/m L+UTI 1000U/m L组)和阴性实验对照组(UTI 1000U/m L),观察RAW264.7细胞生长状态;(4)用不同浓度(10,100,1000 U/m L)UTI预处理2h后,LPS刺激小鼠RAW264.7细胞诱导炎症模型,RT-PCR检测肿瘤坏死因子TNF-αm RNA、IL-6 m RNA、mi R-21的表达,Western Blot法检测UTI(1000 U/m L)时PTEN蛋白表达水平。(5)设置空白组、模型组(LPS 500 ng/m L剌激组)、实验组(LPS+mi R-21模拟剂、LPS+mi R-21抑制剂组):RT-PCR法检测mi R-21的表达,Western Blot法检测PTEN蛋白表达水平。结果:1.UTI对细胞的保护作用1 UTI对RAW264.7细胞的毒性作用:UTI浓度小于1000U/m L时对RAW264.7细胞无毒性作用,各组细胞OD值比较差异无统计学意义(P=0.117);2.不同浓度(10,100,1000U/m L)UTI能有效降低TNF-αm RNA表达及IL-6 m RNA表达(P1<0.05,P2<0.05)。2.不同LPS浓度下TNF-αm RNA、IL-6 m RNA及mi R-21的表达情况与正常组相比,在LPS(100,250,500ng/m L)刺激RAW264.7细胞后,mi R-21、TNF-αm RNA及IL-6 m RNA的分泌量与基础分泌量相比均明显升高(P<0.05),并随LPS浓度升高而增加(P<0.05)。3.UTI对mi R-21表达的影响不同浓度(10,100,1000U/m L)UTI能有效降低mi R-21的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。4.mi R-21对PTEN蛋白表达的影响与空白组相比较,在LPS组中,mi R-21表达上调,PTEN蛋白表达下调;在加入.mi R-21抑制剂组中,mi R-21表达明显下降,PTEN蛋白表达明显升高;mi R-21模拟剂组中,mi R-21表达明显升高,PTEN蛋白表达明显下降(P<0.05)。5.UTI对PTEN蛋白表达的影响基于上述UTI下调mi R-21表达水平的实验结果,进一步观察UTI对mi R-21靶基因PTEN蛋白的影响。实验结果发现,与空白组比较,PTEN蛋白表达水平在LPS组中明显下降,在UTI组中表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.UTI可降低LPS诱导的RAW264.7细胞中TNF-α、IL-6 m RNA的表达。2.LPS可诱导RAW264.7细胞mi R-21的高表达,且呈浓度依赖性;mi R-21高表达可抑制PTEN蛋白的表达。3.UTI可显著下调mi R-21的表达,并上调靶基因PTEN蛋白表达水平。综上所述,UTI可抑制LPS诱导RAW264.7细胞的炎症反应,对细胞起着保护作用,其机制可能与UTI引起mi R-21表达下调有关。