心脏发育是一个复杂的过程,受一系列心脏发育基因在时间和空间上的精确调控。这些基因的突变或异常表达都会导致早期胚胎死亡或者各种心脏病。鉴定在心脏发育过程中起调控作用的基因和分子途径,将促进人们从分子水平认识心脏发育和先天性心脏病发生的机制。vmhc是在心室特异性表达的标志基因。lefty-1和charon(小鼠同源基因cerl-2)是心脏的左右不对称性发育调控途径中的关键基因。斑马鱼是研究心脏发育分子机制的理想模式生物之一。目前国际上在斑马鱼模型中利用lefty-1和charon基因的抗体进行蛋白表达和基因功能的研究鲜有报道。果蝇CG8419基因(脊椎动物同源基因为TRIM45)是我室克隆鉴定的一个人类心脏发育候选基因,初步研究结果提示CG8419可能与果蝇血细胞形成相关。因此制备这些基因的高质量兔抗血清和鼠抗血清有助于深入研究心脏发育的分子机制。本文利用生物信息学选择上述4个基因的亲水抗原区,将扩增出的PCR片段分别插入到原核表达载体中,转入E.coli中,通过IPTG诱导表达GST融合蛋白。蛋白经纯化分离后用于免疫新西兰大白兔或balb/c小鼠以制备多克隆抗体。Western Blot检测结果表明,斑马鱼vmhc抗体的效价为1：3000。进一步利用斑马鱼心脏组织切片免疫组化分析表明vmhc表达定位在细胞核中。vmhc鼠抗的效价达到1：3000；斑马鱼胚胎抗体染色结果表明vmhc蛋白在斑马鱼心脏的心室表达。斑马鱼lefty 1抗体经Western Blot检测结果表明,其效价为1：2000。进一步用斑马鱼组织蛋白特异性表达分析表明,leftyl在斑马鱼发育早期的各个时期都有表达。斑马鱼Charon抗体经Western Blot检测结果表明,其效价为1：2000。进一步用斑马鱼组织蛋白进行Western Blot分析表明Charon主要在心脏表达,且表达强烈,在肠和皮肤也有表达。胚胎抗体染色分析显示Charon主要在斑马鱼的心脏部位表达。研究分析表明制备的果蝇CG8419抗体具有高效特异性,效价为1：2000。利用果蝇组织蛋白表达分析显示CG8419在幼虫期有表达。胚胎抗体染色分析发现CG8419蛋白在唾液腺等组织表达。上述结果表明,本文制备的多克隆抗体的效价高,能用于进一步分析它们在胚胎发育中的蛋白表达。这些抗体为深入研究斑马鱼心脏发育的分子机制创造了条件,也为深入研究这些基因的功能奠定了基础。