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枸橼酸莫沙必利（mosapride citrate）,（±）-4-氨基-5-氯-2-乙氧基-N-[[4-（4-氟苄基）-2-吗啉基]甲基]苯甲酰胺枸橼盐,是一强效、选择性苯甲酰胺类5-HT4受体激动剂,作为新型胃动力药,其越来越多地用于日本和其它一些亚洲国家。相对于莫沙必利药理活性方面的大量研究,其代谢和药物动力学方面的研究则较少,仅鉴定出4种Ⅰ相代谢物。本论文的主要目的是利用小克银汉霉真菌转化系统制备代谢物对照品,采用先进的分析手段,系统研究莫沙必利在大鼠和人体内的代谢和在大鼠体内的药物动力学,并对新代谢物的药理活性进行研究。一、莫沙必利在小克银汉霉真菌中的代谢研究。通过筛选菌种和正交试验优化转化条件,建立了能够转化莫沙必利的雅致小克银汉霉AS 3.156模型。采用超高效液相色谱-二极管阵列-电喷雾三重四级杆串联质谱（UPLC-PDA-ESI-MS/MS）及飞行时间质谱（TOF-MS）技术,发现了13种代谢物,包括8种Ⅰ相和5种Ⅱ相产物。应用提取分离技术从转化液中分离得到了莫沙必利4种主要Ⅰ相代谢物的对照品,通过TOF-MS和核磁共振光谱（NMR）确定了它们的化学结构。分别是:莫沙必利-4’-N-氧化物（M4）、4-氨基-5-氯-2-乙氧基-N-[3-（4-氟苄基氨基）-2-羟丙基]苯甲酰胺（M5）、4-氨基-5-氯-2-乙氧基-N-（2-吗啉基）苯甲酰胺（M6）和4-氨基-5-氯-2-乙氧基-N-[（4-甲酰基-2-吗啉基）甲基]苯甲酰胺（M7）。运用药物代谢规律及ESI-MS、ESI-MS/MS和TOF-MS的信息,推断了其它9种代谢物的结构,分别是:对氟苄基羟基化莫沙必利（M1）、3-（或6-）羟基莫沙必利（M2）、吗啉环羟基化莫沙必利（M3）、N-[（4-乙酰基-2-吗啉基）甲基]-4-氨基-5-氯-2-乙氧基-苯甲酰胺（M8）、莫沙必利-4-葡萄糖结合物（M9）、4-氨基-5-氯-N-（2,3-二羟丙基）-2-乙氧基-苯甲酰胺（M10）、4-氨基-5-氯-2-乙氧基-苯甲酰胺（M11）、莫沙必利-4-硫酸结合物（M12）和4-氨基-5-氯-2-乙氧基-N-[3-[N-（4-氟苄基）甲酰胺]-2-羟丙基]苯甲酰胺（M13）。除M6外,其它12种是首次报道的新化合物。总结了莫沙必利及代谢物的ESI质谱断裂规律。二、莫沙必利在大鼠和人体内的代谢研究。利用代谢物对照品（M4-M6）,采用UPLC-ESI-MS/MS技术,系统研究了莫沙必利在大鼠和人体内的代谢情况并对代谢途径进行了推断。在大鼠和人体内,莫沙必利分别生成18和16种代谢物,其中15种是相同的;共发现19种代谢物,其中至少16种是动物和人体内首次报道的代谢物。利用对照品鉴定了其中3种代谢物（M4-M6）的结构,根据药物代谢规律及ESI质谱断裂规律推断了其它16种代谢物的结构,除M2、M9、M11和M12外,还有:N-去对氟苄基羟基莫沙必利的O-葡萄糖醛酸结合物（M14）、3-或6-羟基-N-去对氟苄基莫沙必利（M15和M16）、4-氨基-5-氯-N-（2-羟基丙胺基）-2-乙氧基-苯甲酰胺（M17）、莫沙必利-4-葡萄糖醛酸结合物（M18）、2-O-去乙基-莫沙必利葡萄糖醛酸结合物（M19）、3-或6-羟基莫沙必利的O-葡萄糖醛酸结合物（M20和M21）、3’-（或5’）-氧-去对氟苄基莫沙必利（M22）、2-O-去乙基-莫沙必利（M23）、3-（或6-）羟基莫沙必利（M24）和莫沙必利4-葡萄糖醛酸结合物（M25,与M18互为同分异构体）。研究提示莫沙必利在大鼠和人两个种属中的代谢几乎不存在质反应（代谢物种类）的种属差异。通过对比研究大鼠胆汁和粪便样品中莫沙必利的代谢情况,发现肠道菌群可能水解Ⅱ相结合代谢物并还原N-氧化物为原形药。阐明了莫沙必利在大鼠和人体内相同的10种代谢途径,其中至少7种是首次报道的,Ⅰ相的有N-去烷基（包括N-去对氟苄基和酰胺-N-去烷基）、O-去乙基、吗啉环开环、一羟基化、N-氧化和杂环N邻位氧化成酮;Ⅱ相的有葡萄糖、葡萄糖醛酸和硫酸结合3种;这些代谢途径还可能相互交叉,生成次级代谢物。总结了莫沙必利在雅致小克银汉霉AS 3.156转化模型、大鼠和人体内的共25种代谢物及相应的代谢反应部位和类型,对比了各种代谢系统的代谢途径。三、莫沙必利在大鼠体内的药物动力学研究。首次发现的莫沙必利-4’-N-氧化物（M4）,由于在体内可能还原为原形药而对莫沙必利药效产生一定影响。为了了解M4在大鼠体内的系统暴露,深入阐明莫沙必利的有效性和安全性,首次建立了同时测定生物样品中莫沙必利及代谢物M4和M6浓度的UPLC-MS/MS方法,该法快速、灵敏,成功应用于莫沙必利灌胃给予大鼠后的药物动力学研究。雄性大鼠体内,莫沙必利与M4和M6的Cmax比值为1:0.032:4.5,AUC比值为1:0.025:10;雌性大鼠体内,三者Cmax比值为1:0.019:0.38,AUC比值为1:0.013:0.40。在雄性大鼠体循环中,莫沙必利仅以较低水平存在,M6以较高水平存在,其系统暴露程度远大于原形药;在雌性大鼠体循环中,莫沙必利以较高水平存在,M6水平较低。M4在雄性和雌性大鼠体内的AUC均小于原形药的3.2%,系统暴露量较小。莫沙必利在雄性大鼠体内经历了较强的首过代谢生成M6吸收入血。莫沙必利、M4和M6在大鼠体内的吸收均有显著的性别差异,它们在雄性大鼠体内的吸收和消除均较雌性大鼠快。莫沙必利的组织分布未见明显的性别差异,以十二指肠壁、盲肠壁、肝和胃壁中的药物浓度较高。莫沙必利在雄性大鼠各主要组织的浓度均低于雌性大鼠,且消除较雌性大鼠快。M4在各主要组织中的分布速度雄性大鼠快于雌性大鼠。M4浓度最高的3个组织是十二指肠壁、盲肠壁和小肠壁,且雌性大鼠比雄性大鼠的高,这是因为雌性大鼠血浆中M4的AUC较雄性大鼠高,从而由血液向各组织转运量大。莫沙必利在大鼠体内的排泄无性别差异。原形药、M4和M6的累积排泄总量达到给药剂量的2/3以上。对上述3种形式而言,尿液是最主要的排泄途径,其次是粪便和胆汁排泄,它们的累积排泄量约占剂量的比例约为3:2:1。M6是最主要的排泄形式、其次是原形,再次是M4,它们的累积排泄量分别约占剂量的37%,28%和12%（雄性大鼠）,24%,26%和16%（雌性大鼠）。原形药主要从粪便中排出,其次是胆汁,几乎不从尿液排泄;M4和M6均主要从尿液排出,胆汁其次,粪便中检测不到M4。M6的累积排泄量在雄性大鼠体内较大,而M4在雌性大鼠体内较大。研究结果首次表明,M4在雄性和雌性大鼠尿样中的累积排泄量约占剂量的10～14%,远大于莫沙必利,该代谢物是莫沙必利较重要的排泄形式之一。四、莫沙必利及莫沙必利-4’-N-氧化物在模拟人工胃肠液中的稳定性。以UPLC-MS/MS法测定莫沙必利及莫沙必利-4’-N-氧化物（M4）在模拟人工胃、肠液中分别孵育不同时间后的剩余药物浓度,发现二者均能稳定存在,没有相互转化现象发生,提示莫沙必利较低的生物利用度不是由在胃肠液中的降解过程引起的。五、莫沙必利3个新代谢物M4、M5和M7对离体豚鼠回肠收缩的增强作用。利用离体豚鼠回肠收缩实验研究了莫沙必利3个新代谢物对其收缩的增强作用。结果表明,M4在较高累积浓度下对离体豚鼠回肠的收缩增强作用强于原形药;M5的增强作用强于原形药;M7的增强作用弱于原形药。3个新代谢物对离体豚鼠回肠收缩增强的作用与原形药没有显著差异,但M5具有稍好的5-HT4受体激动作用,可能有进一步研究开发的价值。总之,本文系统研究了莫沙必利在大鼠和人体内的代谢情况,对其在大鼠体内的药物动力学进行了较全面、深入的研究;研究了原形药及莫沙必利-4’-N-氧化物在人工胃肠、液中的稳定性。探讨了莫沙必利3个新代谢物对离体豚鼠回肠收缩的增强作用。为深刻、全面、系统地评价莫沙必利的有效性和安全性提供依据。