猪流行性腹泻病毒（PEDV）是引起猪流行腹泻（PED）的病原,20世纪70年代PEDV在欧洲被首次发现,随后在世界范围流行。2010年,我国由于PED造成近100万头仔猪死亡,使养猪业遭受严重损失。猪是PEDV的唯一自然宿主,各品种和年龄的猪均可感染,但以仔猪易感性高、症状最为严重,发病仔猪病程7 d左右,表现为腹泻、呕吐、严重脱水等症状,最终衰竭而死,哺乳仔猪病死率达100%。对PED尚没有特异性的防治药物,生产中主要采取疫苗免疫接种,通过对怀孕母猪进行疫苗免疫接种,初生仔猪通过吸吮母乳获得母源抗体,抵抗PEDV的侵害。由于PEDV毒株的变异较快,流行毒株在基因和蛋白方面与疫苗株存在差异,可能是引起疫苗免疫失败的一个原因。另外,商品疫苗（灭活或减毒疫苗）通过注射方式接种母猪,使得妊娠母猪的黏膜免疫应答不能被有效激发,造成母乳中对PEDV起关键作用的Ig A抗体分泌不足,不能提供给仔猪足够的保护效力。卵黄抗体（Ig Y）是通过外源抗原免疫禽类后,从蛋黄中提取的一种免疫球蛋白,Ig Y进入机体能够和相应的抗原发生特异性结合。Ig Y的理化性质稳定,对酸、碱和热具有一定的耐受力。近年来,特异性的Ig Y在防治动物疫病方面有较为广泛应用。本研究通过分离培养PEDV流行毒株,制备PEDV弗氏佐剂灭活苗,免疫产蛋鹌鹑,然后通过比较不同的卵黄抗体提取方法,筛选优化Ig Y的最佳提取方法。对提纯的抗PEDV卵黄抗体进行体外中和试验,以及Ig Y理化性质的检验。获得以下研究结果:（1）猪流行性腹泻病毒流行株的分离鉴定取PEDV核酸阳性的患猪小肠组织,处理后接种Vero细胞,连续传代培养,观察细胞病变。传代培养的第11代出现典型合胞体病变,经RT-PCR扩增出PEDV特异性条带,测序结果表明为PEDV基因序列;IFA鉴定结果显示,细胞中存在可与抗PEDV的N蛋白单克隆抗体结合的病毒。分离获得1株PEDV毒株。（2）PEDV分离株的遗传分析对PEDV分离株的S1基因全长进行克隆、目的片段胶回收纯化,序列分析发现,分离株与2015年四川分离株CH-SCNC-2-2015、广东分离株GD-B和安徽分离株AH2012的S1基因相似性较高,均在99.1%以上,氨基酸相似性达98.4%以上;与弱毒株CV777和弱毒苗株DR13（韩国）的S1基因核苷酸相似性在91.9%～92.0%,氨基酸相似性在89.6%～89.8%。说明得到的PEDV分离株为流行毒株。（3）PEDV灭活疫苗的制备及鹌鹑的免疫将PEDV分离株毒液经过滤除菌后,加入终浓度为0.1%的β-丙内酯灭活,分别与等量的弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂混匀,充分乳化后制成灭活疫苗,进行物理特性、无菌性和安全性检测。选取130只65日龄产蛋鹌鹑,每只胸肌多点注射0.2 m L疫苗,共免疫3次,每次免疫间隔2周。首免接种弗氏完全佐剂疫苗,之后加强免疫均接种弗氏不完全佐剂疫苗。首免后每隔7 d收集鹌鹑蛋,同时采集血液分离血清。将血清及收集的鹌鹑蛋于4℃保存。（4）高免鹌鹑蛋中卵黄抗体的提取取三免后的鹌鹑蛋,分别用水稀释、硫酸铵法、PEG-6000法提取卵黄抗体,纯度分析显示,硫酸铵法提取的卵黄抗体纯度较高,杂蛋白较少,水稀释和PEG-6000法提取的卵黄抗体在30～48 k Da之间杂蛋白较多。水稀释法和PEG-6000法提取的Ig Y蛋白含量分别9.68 mg/m L和8.15 mg/m L,硫酸铵法提取为7.56 mg/m L,但是硫酸铵法提取的Ig Y中抗PEDV抗体效价最高为1:5120,故选取硫酸法提取Ig Y。（5）免疫鹌鹑抗PEDV血清抗体和卵黄抗体的消长规律分析用建立的检测PEDV抗体检测ELISA方法对免疫鹌鹑血清和卵黄抗体中抗PEDV特异性抗体进行检测。结果显示,特异性卵黄抗体的产生要滞后于血清中抗体产生,血清抗体在首免后1周就为检测阳性,而卵黄抗体在首免后2周后才检测为阳性,两种抗体在三免后2周均达到最高,血清抗体高水平维持10 d左右,卵黄抗体高抗体水平维持21 d左右。（6）抗PEDV卵黄抗体体外中和试验以及理化性质的检验抗PEDV卵黄抗体中和效价为1:111。经37℃～56℃保存、p H 3.0～9.0保存胃蛋白酶作用0.5～2 h等处理后,对Ig Y中和PEDV的能力无显著变化。本研究通过分离得到PEDV流行毒株,制备PEDV灭活疫苗免疫产蛋鹌鹑,获得了鹌鹑源抗PEDV卵黄抗体。