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本课题以高灵敏度、低成本、性能稳定、操作简便为目标,在分析了影响系统整体性能因素的基础上,搭建了一套倒置式的共聚焦激光诱导荧光微流控芯片检测系统,包括光学、电路、软件等方面的实现。该检测系统分别采用了中心波长为532nm和473nm的绿光和蓝光半导体激光器作为光源,通过共聚焦光路收集荧光信号,经高性能的滤光片滤光,由光电倍增管进行光电转换后,经后续处理电路放大、A/D转化后将信号输入计算机进行显示。
通过对罗丹明B和荧光素钠两种荧光物质的检测,结果表明系统灵敏度有所提高:对罗丹明B能达到10-10 mol/L的浓度检测限,对荧光素钠的最低浓度检测限为10-12mol/L。详细讨论了系统的信噪比跟多种因素相关,优化了影响信噪比的各因素的参数和条件,包括滤波针孔、显微物镜、共焦针孔、滤色片、光子计数器和软件滤波,以提高信噪比。对于激发光功率,正如实验中所显示,并不是越大越好,而是存在一个范围,这是因为荧光具有一次饱和和二次饱和的特性;实验中对所用的两种激光器的功率范围进行了探讨,以适合相应荧光物质的检测。
本课题所设计的检测器在精确度和探测灵敏度等方面达到了一定的要求,它的进一步完善,可开发出价格低廉、简易实用的共聚焦芯片检测仪,促进微流控芯片的普及和应用。