论文部分内容阅读
羊踯躅（Rhododendron molle G.Don）是杜鹃花科杜鹃花属植物,民间常用于治疗类风湿性关节炎。现代药理学研究证实二萜类成分是其主要药效物质基础及毒性物质基础,具有抗炎、镇痛等药理作用。羊踯躅作为一种临床长期使用的毒性中药,各药用部位化学成分差异较大,特别是其二萜类药效成分/毒性成分种类及含量差异较大,严重影响了其临床应用的安全性和有效性,成为限制其临床使用和新药研发的瓶颈性问题。因此,本课题拟建立羊踯躅根、花、果实各药用部位的化学特征图谱,以明确其主要化学物质基础,为后期羊踯躅各药用部位进一步深入研究,以及临床应用提供充分的科学依据。本文采用现代色谱技术,对羊踯躅根、花、果实各药用部位的主要化学成分,分别进行跟踪性色谱分离及结构确证,共分离鉴定了49个单体化合物,并有25个化合物为羊踯躅植物中首次发现。其中,羊踯躅根提取物中分离鉴定了16个化合物,花提取物中分离鉴定了21个化合物,果实提取物中分离鉴定了18个化合物。这些化合物共包括了19个二萜成分,4个三萜类成分,4个木脂素类成分,8个黄酮类成分,以及14个其他类成分。此外,还有2个化合物为羊踯躅果实中首次发现,1个化合物为羊踯躅花中首次发现。同时,通过对其主成分的跟踪性分离及结构确证,本文研究确定了羊踯躅根中12个主成分,花中11个主成分,以及果实中6个主成分,从而首次建立了羊踯躅根、花、果实各药用部位的化学特征图谱,初步明确了羊踯躅各药用部位主要化学成分特征,为其临床用药提供科学依据,并为后期羊踯躅各药用部位质量标准的制定及其研究开发提供了坚实的理论基础。具体如下:1羊踯躅各药用部位HPLC-ELSD图谱的建立本实验建立了羊踯躅根、花、果实各药用部位的高效液相-蒸发光散射（HPLC-ELSD）色谱分析法。通过收集比较一定批次的羊踯躅主产地的不同药用部位药材,选择代表性产地的湖南羊踯躅来建立羊踯躅根、花、果实各药用部位的HPLC-ELSD图谱。本方法结果显示,色谱峰分离度良好,基线平稳。2羊踯躅根化学特征图谱的建立及化合物制备通过现代色谱分离技术及谱学方法,对羊踯躅根主要成分进行跟踪、分离及结构确定,从根中分离并鉴定了16个化合物,包括9个二萜类成分:Gen-2:mollolide A、Gen-7:1β-rhodomoside B、Gen-8:craiobioside B、Gen-9:羊踯躅素XXVI、Gen-11:rhodomoside C、Gen-13:rhodomoside B、Gen-17:羊踯躅素I、Gen-18:闹羊花毒素III、Gen-19:闹羊花毒素VI;4个木脂素类成分:Gen-1:polystachyol、Gen-3:nudiposide、Gen-14:racemiside、Gen-15:lyoniside;以及3个其它类成分:Gen-4:柑橘苷A、Gen-5:everninic acid methy lester-2-O-β-xylopyranosyl-（1→6）-β-glucopyranoside、Gen-10:everlastosides H。其中,7个化合物Gen-1、Gen-3、Gen-4、Gen-8、Gen-10、Gen-14、Gen-15为羊踯躅中首次发现。通过对其主成分的跟踪性分离,并对获得的单体化合物进行结构确证,从而确定了羊踯躅根中的12个主成分的化学结构,建立了羊踯躅根的化学特征图谱。12个主成分中,包括6个二萜类成分:Gen-17:羊踯躅素I（峰2）,Gen-9:rhodomollein XXVI（峰3）,Gen-19:闹羊花毒素VI（峰4）,Gen-7:1β-rhodomoside B（峰5）,Gen-13:rhodomoside B（峰6）,Gen-18:闹羊花毒素III（峰8）;4个木脂素类成分:Gen-1:polystachyol（峰7）,Gen-15:lyoniside（峰9）,Gen-14:racemiside（峰10）,Gen-3:nudiposide（峰11）;2个其它类成分:Gen-10:everlastosides H（峰1）,Gen-5:everninic acid methyl ester-2-O-β-xylopyranosyl-（1→6）-β-glucopyranoside（峰12）。3羊踯躅花中化学特征图谱的建立及化合物制备通过现代色谱分离技术及谱学方法,对羊踯躅花主要成分进行跟踪、分离及结构确定,从花中分离并鉴定了21个化合物,包括9个二萜类成分:Hua-2:闹羊花毒素II、Hua-3:2-O-methylrhodojaponin VII、Hua-4:闹羊花毒素I、Hua-9:羊踯躅素XI、Hua-13:羊踯躅素L、Hua-15:羊踯躅素XIII、Hua-21:羊踯躅素I、Hua-22:闹羊花毒素III、Hua-23:闹羊花毒素VI;6个黄酮类成分:Hua-1:山柰酚-3-O-α-鼠李糖苷,Hua-5:槲皮苷,Hua-6:槲皮素-3-O-β-半乳糖苷,Hua-8:淫羊藿苷,Hua-11:3,7-二甲氧基-5,3’,4’-三羟基黄酮、Hua-12:槲皮素;6个其它类成分:Hua-10:9,12,13-三羟基-10,15-十八碳二烯酸、Hua-14:acernikol、Hua-17:对羟基苯甲酸、Hua-18:原儿茶酸、Hua-19:5-O-p-香豆酰奎尼酸、Hua-20:咖啡酸。其中,8个化合物:Hua-1、Hua-8、Hua-10、Hua-11、Hua-14、Hua-17、Hua-19、Hua-20为羊踯躅中首次发现;此外,Hua-3为羊踯躅花中首次发现。通过对其主成分的跟踪性分离,并对获得的单体化合物进行结构确证,从而确定了羊踯躅花中的11个主成分,建立了羊踯躅花的化学特征图谱。11个主成分,包括5个二萜类成分:Hua-21:羊踯躅素I（峰III）,Hua-23:闹羊花毒素VI（峰V）,Hua-22:闹羊花毒素III（峰VI）,Hua-3:2-O-methylrhodojaponin VII（峰VIII）,Hua-2:闹羊花毒素II（峰X）;3个黄酮类成分:Hua-6:槲皮素-3-O-β-半乳糖苷（峰VII）,Hua-5:槲皮苷（峰IX）,Hua-1:山柰酚-3-O-α-鼠李糖苷（峰XI）;3个其它类成分:Hua-17:对羟基苯甲酸（峰II）,Hua-19:5-O-p-香豆酰奎尼酸（峰IV）,Hua-20:咖啡酸（峰I）。4羊踯躅果实化学特征图谱的建立及化合物制备通过现代色谱分离技术及谱学方法,对羊踯躅果实主要成分进行跟踪、分离及结构确定,从果实中分离并鉴定了18个化合物,包括7个二萜类成分:XQW-2:羊踯躅素Ⅰ、XQW-3:闹羊花毒素VI、XQW-8:闹羊花毒素III、XQW-11:黄杜娟素A、XQW-13:grayanotoxin II、XQW-18:羊踯躅素XIX、XQW-19:2-O-methylrhodojaponin VI;4个三萜类成分:XQW-12:2α,3α,19α,23α-四羟基-12-烯-28-乌苏酸、XQW-24:2α-羟基齐墩果酸、XQW-25:蔷薇酸、XQW-26:19α-羟基乌索酸;2个黄酮类成分:XQW-9:双氢杨梅素、XQW-27:蛇葡萄素-4’-O-β-吡喃葡萄糖,以及5个其它类成分:XQW-1:β-（9’Z,12’Z,15’Z）-octadecatrienoic acid monoglyceride、XQW-4:5’-β-glucopyranosyloxyjasmonic acid、XQW-16:（24S）豆甾-4-烯-3-酮、XQW-17:二十九烷-10-醇、XQW-29:（1S,2S,2’Z）-2-（5’-Hydroxypent-2’-enyl）-3-oxo-cyclopentaneacetic acid。其中,XQW-1、XQW-4、XQW-12、XQW-16、XQW-17、XQW-24、XQW-25、XQW-26、XQW-27、XQW-29等10个化合物为羊踯躅中首次发现;另外,XQW-11、XQW-19为羊踯躅果实中首次发现。通过对其主成分的跟踪性分离,并对获得的单体化合物进行结构确证,从而确定了羊踯躅果实中的6个主成分的化学结构,建立了羊踯躅果实的化学特征图谱。6个主成分包括3个二萜类成分:XQW-2:羊踯躅素I（峰B）,XQW-3:闹羊花毒素VI（峰D）,XQW-8:闹羊花毒素III（峰F）;2个黄酮类成分:XQW-27:蛇葡萄素-4’-O-β-吡喃葡萄糖苷（峰A）,XQW-9:双氢杨梅素（峰C）;1个脂肪酸类成分:XQW-29:（1S,2S,2’Z）-2-（5’-Hydroxy-pent-2’-enyl）-3-oxocyclopentaneacetic acid（峰E）。本文首次建立了羊踯躅根、花、果实各药用部位的化学特征图谱,初步明确了羊踯躅各药用部位主要化学成分特征。研究结果显示,羊踯躅各药用部位均含有以闹羊花毒素III和闹羊花毒素VI为代表的木藜芦烷型二萜类成分,但二萜类成分的含量差异相对较大。其中,果实中二萜成分含量最高,花中其次,而根中相对最低。此外,根中则有较多的以racemiside为代表的环木脂素苷类成分;花中含有较多的以山柰酚-3-O-α-鼠李糖苷、槲皮苷、槲皮素-3-O-β-半乳糖苷为代表的黄酮醇苷类成分;同时,以双氢杨梅素为代表的二氢黄酮醇类成分在果实中的含量占比相对较高。本文通过羊踯躅各药用部位化学特征图谱研究,明确了羊踯躅各药用部位主要化学成分特征,为其临床用药提供科学依据,并为后期羊踯躅各药用部位质量标准的制定及其研究开发提供了坚实的理论基础。