【摘 要】
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目的:膝骨关节炎（Knee osteoarthritis,KOA）是一种慢性退行性关节疾病,以关节软骨破坏、软骨下骨重塑和滑膜炎症为主要特征。在全球范围内KOA患病率高,危害性大,缺乏有效的临床治疗药物和方法。在本研究中,我们研究是否能通过调控淋巴管回流功能治疗膝骨关节炎,以及独活寄生汤是是否通过调控淋巴管回流功能改善KOA小鼠关节结构或延缓KOA小鼠关节退变。方法:1.AAV-VEGF-C调控淋
【基金项目】
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国际自然科学基金面上项目（NO.81873321）； 国家自然科学基金优秀青年科学基金项目（NO.81822050）； 长宁区“光华卓越PI工程（NO.2016-01,2016-06）；
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目的:膝骨关节炎（Knee osteoarthritis,KOA）是一种慢性退行性关节疾病,以关节软骨破坏、软骨下骨重塑和滑膜炎症为主要特征。在全球范围内KOA患病率高,危害性大,缺乏有效的临床治疗药物和方法。在本研究中,我们研究是否能通过调控淋巴管回流功能治疗膝骨关节炎,以及独活寄生汤是是否通过调控淋巴管回流功能改善KOA小鼠关节结构或延缓KOA小鼠关节退变。方法:1.AAV-VEGF-C调控淋巴回流功能治疗膝骨关节炎的体内研究10周龄雌性C57BL/6小鼠双膝关节造模,将AAV-VEGF-C或对照AAV-Luc注射到KOA小鼠的关节中。注射后3个月后使用生物发光成像检测AAV是否持续表达;采用超声分析关节肿胀程度;步态分析检测膝关节功能;采用吲哚菁绿近红外呈现（NIR-ICG）检测关节淋巴回流功能;采用ABOG染色检测膝关节结构变化;采用OARSI score评分来评估关节退变程度;采用免疫组织化学染色诊断膝关节软骨胶原含量表达,评估膝关节退变程度;通过免疫荧光染色检测膝关节周围淋巴管分布情况2.独活寄生汤调控淋巴回流功能治疗膝骨关节炎的体内实验研究10周龄雄性C57BL/6小鼠右膝关节进行手术造模,左膝同样位置将关节腔暴露但不损伤关节结构,作为假手术对照组。将小鼠随机分成3组,KOA模型组给予PBS溶液;独活寄生汤组给予中药复方独活寄生汤;莫比可组给予莫比可片,每只小鼠隔日灌胃0.2ml溶液。分别在造模后6周、12周时进行检测并取材,每组8只。采用超声分析关节肿胀程度;步态分析检测膝关节功能;采用吲哚菁绿近红外呈现（NIR-ICG）检测关节淋巴回流功能;采用ABOG染色检测膝关节结构变化;采用OARSI score评分来评估关节退变程度;采用免疫组织化学染色检测VEGF-C表达含量和膝关节软骨胶原含量表达,评估膝关节退变程度;通过免疫荧光染色检测膝关节周围淋巴管分布情况结果:1.AAV-VEGF-C改善淋巴管回流功能,延缓膝骨关节炎进展生物荧光成像显示AAV-VEGF-C及AAV-Luciferase12周均在体内持续表达。注射VEGF-C12周后淋巴回流功能改善;注射VEGF-C12周后关节肿胀程度降低;步态分析显示VEGF-C组功能有所改善,步速相对增快,站立时间相对增长;ABOG染色显示VEGF-C组软骨损伤较少,OARSI评分较低;免疫组化染色结果显示,VEGF-C组在12周时VEGF-C表达含量高,能提高KOA小鼠膝关节ColⅡ的含量,降低KOA小鼠膝关节ColⅩ含量;石蜡切片免疫荧光双染色表明,VEGF-C组毛细血管和成熟淋巴管在12周时增加。2.独活寄生汤改善6周、12周KOA小鼠淋巴回流功能,延缓膝骨关节炎进展PBS组淋巴回流功能较假手术组明显降低。独活寄生汤治疗后6周和12周淋巴引流功能改善。独活寄生汤治疗后6周和12周小鼠关节肿胀程度降低。独活寄生汤治疗后6周和12周步态有所改善。ABOG染色显示独活寄生汤组软骨损伤较少,OARSI评分较低。免疫组化染色结果显示,独活寄生汤汤在6周和12周时均能提高KOA小鼠膝关节ColⅡ的含量、降低KOA小鼠膝关节ColⅩ。石蜡切片免疫荧光双染色表明,独活寄生汤汤组毛细血管和成熟淋巴管在6周时增加。结论:1.膝关节注射AAV-VEGF-C可以促进KOA小鼠膝关节周围淋巴管生成,有效改善淋巴回流功能,缓解关节肿胀,延缓膝骨关节炎退行性变。2.独活寄生汤可以改善KOA淋巴回流功能,增加淋巴管数量,改善KOA关节肿胀程度。独活寄生汤可以改善KOA关节结构、延缓关节软骨的退行性变,延缓ColⅡ的降解、延缓ColⅩ的生成。独活寄生汤可以在早起促进淋巴管的生成。
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