产阿魏酸酯酶菌筛选、培养条件及酶学性质研究

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阿魏酸酯酶是半纤维素降解酶系的组成部分之一,它可以打断半纤维素之间的、半纤维素与木素之间交联的酯键,不仅能促进半纤维素、木素与纤维素的分离,提高细胞壁的降解效率,还能促进非常重要的保健食品原料阿魏酸的分离。阿魏酸酯酶在生物能源、食品、制浆造纸和生物合成中具有广泛的应用价值。本论文主要从阿魏酸酯酶产生菌的筛选、鉴定、发酵条件优化、酶学特性以及酶解产物的薄层层析(TLC)分析等几方面进行了研究。本论文中采用阿魏酸乙酯为唯一碳源,筛选到具有产阿魏酸酯酶的活性的菌株一百多株。从细菌菌株中复筛到菌株G3-7酶活最高。通过对G3-7进行16SrDNA分析,结合形态观察、生理生化指标及生物学的特性初步确定此菌株属于伯克霍尔德式菌属(Burkhoderia)。对筛选到的G3-7菌株液体摇瓶产阿魏酸酯酶的条件进行了优化。确定其最适培养基条件为:菌株G3-7以1%的接种量在含50mL葡萄糖10g/L、KH2PO40.37 g/L,MgSO4·7H2O 0.25 g/L, CaCl2·2H2O 0.07 g/L, FeCl30.02 g/L,酵母提取物0.4g/L, pH6.5培养基的250mL三角瓶中37℃预培养3d后再加入1%麸皮(WB)诱导产酶。培养基和培养条件优化后,该菌株的产酶水平提高了37%。G3-7所产的粗酶液进行了酶学性质的分析,当以对硝基苯酚阿魏酸酯(4-nitrophenyl ferulate)作为反应底物时,G3-7阿魏酸酯酶胞外粗酶液作用的最适温度为40。C,最适pH为7.5,底物最适浓度为7.0mM。同时该酶对四甲基伞形乙酸酯、对硝基苯酚乙酸酯没有催化活性,对对硝基苯酚月桂酸酯和对硝基苯酚豆蔻酸酯等含有酯键的碳长链的底物具有较高的催化活性。确定了阿魏酸(FA)的薄层层析(TLC)分析条件。通过TLC对G3-7酶液的降解产物的研究表明:胞外酶、胞内酶和胞壁酶对底物去淀粉麦麸(DSWB)、阿魏酸甲酯和阿魏酸乙酯降解后用TLC分析都有FA产生,以胞外酶对底物DSWB的效果最好。
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