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目的:探讨四逆散有效组分改善睡眠作用的机制。方法:本实验首先采用戊巴比妥钠所致小鼠睡眠实验方法,以小鼠入睡潜伏时间和睡眠时间为指标,开展了验证四逆散有效组分改善睡眠作用的实验研究、四逆散有效组分改善睡眠作用的量效与时效关系研究、四逆散有效组分与四逆散改善睡眠作用的比较研究;在此基础上,利用酶联免疫、化学比色等多种技术,基于GABA能神经系统、5-HT能神经系统、NO信号通路、SP、细胞因子(IL-1β、TNF-α、PGE2、PGD2、IL-6)介导的睡眠理论,开展了四逆散有效组分改善睡眠的作用机制研究。结果:一、四逆散有效组分改善睡眠作用的研究1.验证四逆散有效组分改善睡眠作用的实验研究结果表明,四逆散有效组分(33.00mg/ml,660.00mg/kg)经灌胃途径,连续给药7天后,对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠持续时间有显著延长作用,并能缩短入睡的潜伏时间,二者与空白组比较有极显著性差异(p<0.01)。2.四逆散有效组分改善睡眠作用的量效关系研究结果表明,四逆散有效组分给药剂量330.00 mg/kg时开始有效,对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠入睡潜伏时间有缩短作用,与空白组比较有显著性差异(p<0.05);在给药剂量660.00 mg/kg时达到药效高峰,对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠持续时间有显著延长作用,并能缩短入睡的潜伏时间,二者与空白组比较有极显著性差异(p<0.01);在给药剂量1320.00 mg/kg时药效减弱,但仍对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠持续时间仍有显著延长作用,并能缩短入睡的潜伏时间,二者与空白组比较有极显著性差异(p<0.01)。3.四逆散的有效组分改善睡眠作用的时效关系研究结果表明,四逆散有效组分(66.00mg/ml,660.00mg/kg, i.p.)经腹腔注射途径,在连续给药4天时开始起效,对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠持续时间有显著延长作用,与空白组比较有显著性差异(p<0.05),并能缩短入睡的潜伏时间,与空白组比较有极显著性差异(p<0.01);在连续给药5天、6天时,随着给药时间的增加,其对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠持续时间的延长作用、对入睡的潜伏时间的缩短作用均逐渐增强,与空白组比较有极显著性差异(p<0.01)。4.四逆散有效组分与四逆散改善睡眠作用的比较研究结果表明,在最佳给药剂量和最短起效时间的条件下,四逆散有效组分(66.00mg/ml,660.00mg/kg, i.p.)、四逆散(250.00mg/ml,5000 mg/kg)对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠持续时间的入睡的潜伏时间的缩短作用两者接近,无显著性差异,对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠持续时间的延长作用两者有极显著性差异(p<0.01),四逆散有效组分睡眠持续时间延长率达99.82%为四逆散睡眠持续时间延长率38.34%的2.6倍。二、四逆散有效组分改善睡眠作用的机制研究1.四逆散有效组分联合氟马西尼对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠的影响研究结果表明,氟马西尼、四逆散有效组分联合应用对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠持续时间有延长作用,与空白组比较无显著性差异(P>0.05);与四逆散有效组分组比较有显著性差异(P<0.05)。2.四逆散有效组分联合5-HTP对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠的影响研究结果表明,四逆散有效组分与5-HTP联合应用,对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠持续时间有显著延长作用,与空白组比较有极显著性差异(P<0.01)。阈剂量四逆散有效组分与PCPA联合应用对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠持续时间有延长作用,但与空白组比较无显著性差异(P>0.05)。3.四逆散有效组分联合PCPA对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠的影响研究结果表明,四逆散有效组分与PCPA联合应用对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠持续时间有延长作用,但与空白组比较无显著性差异(P>0.05)。4.四逆散有效组分联合L-Arg对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠的影响研究结果表明,四逆散有效组分与L-Arg联合应用对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠持续时间有延长作用,但与空白组比较无显著性差异(P>0.05).5.四逆散有效组分联合L-NAME对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠的影响研究结果表明,四逆散有效组分与L-NAME联合应用虽对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠持续时间有延长作用,但与空白组比较无显著性差异(P>0.05)。6.四逆散有效组分对小鼠全脑、丘脑和脑干NO含量的影响研究结果表明,四逆散有效组分经腹腔注射途径,在连续给药4天,能显著增加小鼠全脑的NO含量,与空白组比较有显著性差异(p<0.05);能显著增加脑干、丘脑NO含量,与空白组比较有极显著性差异(p<0.01)。7.四逆散有效组分对小鼠全脑、丘脑、脑干SP含量的影响研究结果表明,四逆散有效组分经腹腔注射途径,连续给药4天,小鼠全脑、丘脑、脑干的SP含量,与空白组比较无显著性差异(p>0.05)。8.四逆散有效组分对小鼠全脑、丘脑、脑干IL-1β含量的影响研究结果表明,四逆散有效组分经腹腔注射途径,连续给药4天,能显著降低小鼠全脑的IL-1β含量,与空白组比较有显著性差异(p<0.05);对丘脑、脑干的IL-1β含量略有增加,但与空白组比较均无显著性差异( p>0.05)。9.四逆散有效组分对小鼠全脑、丘脑、脑干TNF-α含量的影响研究结果表明,四逆散有效组分经腹腔注射途径,连续给药4天,能显著增加小鼠全脑、脑干的TNF-α含量,与空白组比较有显著性差异(p<0.05);能显著降低丘脑的TNF-α含量,与空白组比较有极显著性差异(p<0.01)。10.四逆散有效组分对小鼠全脑、丘脑、脑干PGD2含量的影响研究结果表明,四逆散有效组分经腹腔注射途径,连续给药4天,能显著降低小鼠全脑、脑干的PGD2含量,与空白组比较有显著性差异(p<0.05);对丘脑的PGD2含量略有降低,与空白组比较无显著性差异(p>0.05)。11.四逆散有效组分对小鼠全脑、丘脑、脑干IL-6含量的影响研究结果表明,四逆散有效组分经腹腔注射途径,连续给药4天,能显著降低小鼠全脑的IL-6含量,与空白组比较有显著性差异(p<0.05);能显著增加丘脑的IL-6含量,与空白组比较有显著性差异(p<0.05);对脑干的IL-6含量略有增加,与空白组比较无显著性差异(p>0.05)。12.四逆散有效组分对小鼠全脑、丘脑、脑干PGE2含量的影响研究结果表明,四逆散有效组分经腹腔注射途径,连续给药4天,小鼠全脑、丘脑、脑干的PGE2含量,与空白组比较无显著性差异(p>0.05)。结论:1、四逆散有效组分具有改善睡眠的作用,其腹腔注射途径给药最佳有效剂量为660.00mg/kg、最短起效时间为连续给药4天。2、四逆散有效组分具有改善睡眠的作用机制由GABA能神经系统、5-HT能神经系统、NO信号通路、细胞因子(IL-1β、TNF-α、PGD2、IL-6)介导。