论文部分内容阅读
目的:观察氯化钴(CoCl2)模拟缺氧环境下对大鼠视网膜前体细胞(RPCs)中血管内皮生长因子164(VEGF164)、轴突坍塌导向因子(SEMA3A)表达的影响,探讨RPCs中二者在缺氧条件下相互作用关系及意义。方法:全神经球贴壁法分离、培养RPCs。免疫组化法鉴定RPCs,检测VEGF164、SEMA3A及二者共同受体NRP-1的表达。应用CCK8法检测不同浓度CoCl2(0、50、100、150、200μmol/L)干预24小时(h)以及检测150μmol/L CoCl2作用不同时间(0、12、24、36、48、72h)后RPCs活性的变化,应用RealTime PCR及ELISA,检测上述各组RPCs VEGF164及SEMA3AmRNA及蛋白的表达。结果:全神经球贴壁法培养的RPCs高表达神经干细胞特异性标记(Nestin),较高表达VEGF164、SEMA3A、NRP-1,自然分化后表达视网膜细胞标志性抗原Rhodopsine、 MAP-2和GFAP。CoCl2在一定浓度(0200μmol/L)及作用时间范围(048h)内,RPCs活性不受损伤,缺氧培养时间相同时,随着CoCl2浓度的增加VEGF mRNA的表达逐渐增加而后降低,SEMA3A的表达降低后逐渐增加。当CoCl2浓度为150μmol/L培养不同时间时,随着缺氧干预时间的延长,VEGF mRNA的表达亦是逐渐增加而后降低,SEMA3A的表达降低后逐渐增加。蛋白与基因表达的变化基本一致。结论:全神经球贴壁法培养RPCs能较好的表达干细胞特性。体外培养的正常RPCs表达VEGF164、SEMA3A、NRP-1。一定浓度及作用一定时间的CoCl2对RPCs活性损伤不明显。CoCl2模拟缺氧环境下,缺氧使RPCs VEGF164和SEMA3A的分泌具有时间和剂量依赖性,可能在缺氧一定程度后通过上调SEMA3A来降低VEGF164的表达,这可能成为对抗新生血管性视网膜病变的保护机制之一。