日本乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)是由日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的一种虫媒性的人兽共患病,每年大约有67000例感染病例和20000例死亡病例,具有重要的公共卫生学意义。猪通常作为JEV感染人之前的储存宿主,在感染该病毒后,妊娠母猪会出现流产、死胎、胎儿畸形以及木乃伊胎;公猪则出现睾丸炎,繁殖障碍,对畜牧养殖业造成巨大影响。黄病毒的3’非编码区在病毒生命周期中扮演十分重要的角色。在对黄病毒科的其他成员(如登革热病毒、西尼罗河病毒等)病毒非编码区形成的RNA元件的研究中发现SL-Ⅱ结构以及3’SL结构在病毒复制上的重要功能并且对细胞病变、小鼠致病性有重要影响。另外,黄病毒NS5蛋白在病毒复制以及拮抗宿主天然免疫方面也有至关重要的作用,其中NS5蛋白中RNA依赖性RNA聚合酶(Rd Rp)区域能够特异性识别病毒基因组3’端从而起始合成病毒RNA。然而乙型脑炎病毒在这方面的研究较少,本研究基于乙型脑炎病毒的序列分析以及病毒3’非编码区RNA二级结构模型对比,对乙型脑炎病毒3’非编码区RNA二级结构元件SL-Ⅳ发生碱基突变以及NS5蛋白位于Rd Rp区域的644位点突变后会对乙型脑炎病毒的复制以及致病性产生的影响进行探讨。利用反向遗传系统,构建具有突变基因的乙型脑炎病毒全长感染性克隆,通过体外转录方式获得具有感染性的病毒RNA,随后转染细胞,拯救出突变病毒之后比较携带不同突变基因的病毒在BHK-21细胞上增殖、病毒复制能力以及对小鼠致病性的变化。本研究发现,在乙型脑炎病毒3’非编码区中第248位核苷酸由胸腺嘧啶改变为胞嘧啶时,其基因组第258位核苷酸也同时会由腺嘌呤改变为鸟嘌呤;第254位核苷酸在自然界中就存在鸟嘌呤到腺嘌呤的突变,而自然界中主要以鸟嘌呤存在,突变的碱基导致SL-Ⅳ结构顶端环缩小,而侧链环增大;SL-Ⅳ具有突变基因的突变病毒在BHK-21细胞上复制能力明显上调;携带突变基因的SL-Ⅳ与乙型脑炎病毒改变了第644位氨基酸(Asn→Thr)的NS5蛋白在复制上存在协同作用,并且在病毒的复制前期,这种协同作用会产生大量病毒RNA负链,从而大大提高病毒的复制;虽然具有突变基因的SL-Ⅳ结构的突变病毒在细胞上的复制能力得到了显著提高,亦可产生细胞病变,然而病毒释放高峰延后,且对小鼠的致病力明显下降。本研究对乙型脑炎病毒3’非编码区的RNA元件的功能研究进行了补充,对未来黄病毒的进一步研究提供新视角,对黄病毒以NS5蛋白作为药物靶标研制新型药物提供新的思路。