常温下奥拉帕尼对大鼠体外供肝灌注保存的实验研究

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目的:探究在不同温度下奥拉帕尼对大鼠离体供肝灌注保存的保护作用。方法:选取Wistar系雄性大鼠80只,SPF级。将50只大鼠随机分为5组:G0:对照组(肝脏离体后不灌注保存)10只;G1:低温组(单纯UW液4℃灌注肝脏)10只;G2:低温联合奥拉帕尼组(奥拉帕尼加入UW液4℃灌注肝脏)10只;G3:常温组(单纯UW液37℃灌注肝脏)10只;G4:常温联合奥拉帕尼组(奥拉帕尼加入UW液37℃灌注肝脏)10只;另30只为肝移植受体。术前禁食12h,不禁水,术前用10%水合氯醛以0.3ml/100g经腹腔麻醉,麻醉后取腹部“十”字形切口进入腹腔,分离门静脉,留置针插入门静脉后取出针芯并用4号丝线固定,连接灌注机械泵,以(6.0±1.0)ml/min的流速在室温下泵入PBS液,并剪开下腔静脉放血,持续原位灌洗肝脏,待20min后肝脏变为均匀土黄色,灌注流出液变清澈后完整分离肝脏。G0组离体肝脏直接取肝送检。G1组离体肝脏放入装有200mlUW液的烧杯中,并将烧杯置于碎冰中维持灌注液0-4℃,将机械泵入口置于烧杯中,同理G2组离体肝脏放入装有200ml含奥拉帕尼(浓度50nM)UW液中,烧杯置于碎冰中维持灌注液0-4℃。G3组离体肝脏放入装有200mlUW液的烧杯中,烧杯置于恒温水浴箱中维持灌注液37℃。G4组离体肝脏放入装有200ml含奥拉帕尼(浓度50nM)UW液中,烧杯置于恒温水浴箱中维持灌注液约37℃。以上G1-G4组保持持续回流循环灌注4h后撤走机械泵后烧杯置于碎冰中在0-4℃下继续保存2h。所有组随机选4只大鼠选肝脏固定位置取肝左叶组织行HE和TUNEL染色,并用免疫组化观察caspase-3表达情况。提取肝组织中Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9、IL-1β、IL-6、TNF-α反应肝脏凋亡和炎症水平各项细胞因子,并比较各项指标。各组另6只大鼠供肝行原位肝移植,观察受体术后1、3、7日肝功能以评价各组灌注保存效果。结果:1.单纯常温灌注保存较单纯低温灌注保存供肝组织细胞凋亡及炎症水平降低;2.UW液中加入奥拉帕尼灌注后能减轻供肝组织中细胞凋亡和炎症反应;3.常温联合奥拉帕尼灌注保存供肝可以更好的降低细胞凋亡和炎症反应;4.常温联合奥拉帕尼灌注保存供肝行肝移植后肝功能指标更佳。结论:1.常温下灌注保存效果优于低温灌注保存;2.奥拉帕尼有利于供肝灌注保存;3.常温联合奥拉帕尼的灌注保存效果优势更明显;4.常温联合奥拉帕尼灌注保存供肝改善行肝移植术后肝功能效果更佳。
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