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硅藻具有特殊的硅质细胞壁,是海洋所有真核微藻中最大的群体,占海洋初级生产的约40%。两种已经测序完成的硅藻中心硅藻纲的假微型海链藻(Thalassiosira pseudonana)和羽纹硅藻纲的三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)的基因组中长末端重复反转录转座子(LTR-RTs)的含量分别为1.1%和5.8%。许多研究显示反转录转座子转录活性在胁迫条件下被激活,从而对基因组大小、结构、功能和进化等产生重要的影响。三角褐指藻LTR反转录转座子Surcouf(Scf)的转录受氮饥饿的诱导,对于生活在整体缺氮的海洋中的硅藻而言LTR反转录转座子在氮胁迫下的转座除对基因组的影响外还可能有重要的生态学意义。
本文利用反向PCR的方法分析了氮限制下三角褐指藻LTR反转录转座子Scf插入的位点,通过McrPCR和重亚硫酸盐测序初步鉴定了转座插入后基因甲基化的水平及位点,采用荧光定量PCR技术检测了转座子插入基因或邻近基因表达水平。研究结果显示,长期氮胁迫条件下Scf插入到糖基转移酶基因的内部与一个未知功能基因的下游,并使得前者表达水平下调,而后者表达水平上调;转座插入后转座子在DNA水平上重新被甲基化修饰。重亚硫酸盐测序结果显示3个甲基化位点均是CpG二核苷酸中的胞嘧啶被甲基化,其中两个位点位于Scf的LTR上,另外一个位点在39610基因的下游。
硅藻同化产物主要是油和金藻多糖,而氮限制可促进细胞油脂的积累。通过分析鉴定出的氮限制下转座子Surcouf插入的位点,我们初步确定了一个与藻细胞油脂合成相关的新基因。氮限制下,糖基转移酶的下调可使得细胞内的碳流用于脂质的合成,从而促进了细胞油脂的积累。利用转座子插入的方法将可以帮助我们鉴定出更多与油脂合成相关的基因,解析硅藻油脂合成的机理。