【摘 要】
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背景口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）是一种常见的头颈部肿瘤,其发病隐匿、易复发和转移,晚期治疗手段单一且疗效有限,临床预后较差。盐酸安罗替尼（anlotinib hydrochloride,AL3818）是一种多靶点酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitor,TKI）,可靶向阻断血管生成因子与其受体（vascular e
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背景口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）是一种常见的头颈部肿瘤,其发病隐匿、易复发和转移,晚期治疗手段单一且疗效有限,临床预后较差。盐酸安罗替尼（anlotinib hydrochloride,AL3818）是一种多靶点酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitor,TKI）,可靶向阻断血管生成因子与其受体（vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR）结合,抑制肿瘤血管生成和部分肿瘤细胞的功能。真核翻译起始因子5A2（eukaryotic translation initiation factor 5A2,EIF5A2）是EIF家族中一种保守的小分子量酸性蛋白质,可促进肿瘤的发生和发展,但其在口腔鳞癌中的作用尚不明确。目的本研究主要探讨盐酸安罗替尼对口腔鳞状细胞癌细胞系的影响及其可能机制,为临床应用盐酸安罗替尼治疗口腔鳞状细胞癌提供理论依据。方法本课题组口腔鳞状细胞癌细胞系由首都医科大学口腔医学院病理科刘艳艳副教授惠赠,分别为口腔鳞状细胞癌野生型细胞（Cal27）以及运用CRISPR/Cas9技术构建EIF5A2基因敲除的Cal27细胞（Cal27-2C5）。用不同浓度的盐酸安罗替尼处理OSCC细胞（Cal27、Cal27-2C5）后:（1）MTT实验法检测Cal27和Cal27-2C5的体外存活能力;（2）细胞克隆实验检测细胞体外克隆形成能力;（3）Transwell实验探讨口腔鳞状细胞癌细胞的迁移及侵袭能力;（4）流式细胞技术检测口腔鳞状细胞癌细胞周期及凋亡的变化;（5）Western blotting法检测盐酸安罗替尼对Cal27细胞中EIF5A2的表达水平的影响;（6）构建EIF5A2过表达细胞系,并进行体外迁移和侵袭实验,探讨其在盐酸安罗替尼抗口腔鳞状细胞癌细胞系中的作用;（7）使用Western blotting法检测口腔鳞状细胞癌细胞系中周期、凋亡及上皮-间充质转化相关蛋白的表达情况;（8）采用Graph Pad Prism 7.00对实验所取得的结果进行统计学分析,当P＜0.05时认为有统计学差异。结果1.盐酸安罗替尼（anlotinib hydrochloride,AL3818）可显著抑制口腔鳞状细胞癌细胞系的体外存活能力（P＜0.05）。2.盐酸安罗替尼抑制口腔鳞状细胞癌细胞的体外克隆形成能力（P＜0.05）。3.盐酸安罗替尼显著抑制Cal27细胞的体外迁移能力（P＜0.01）,但对Cal27-2C5细胞的体外迁移能力并没有显著的影响（P＞0.05）。4.盐酸安罗替尼能显著抑制Cal27细胞的体外侵袭能力（P＜0.05）,但对Cal27-2C5细胞的体外侵袭能力并没有显著影响（P＞0.05）。5.盐酸安罗替尼可将细胞周期阻滞在G2/M期,呈现剂量依赖性（P＜0.05）。6.盐酸安罗替尼可以诱导OSCC细胞凋亡,呈现剂量依赖性（P＜0.01）。7.盐酸安罗替尼可下调Cal27细胞中EIF5A2的表达水平。8.使用EIF5A2过表达及阴性对照病毒（vector）分别感染Cal27-2C5细胞,将感染后的细胞分别命名为Cal27-2C5-EIF5A2及Cal27-2C5-VECTOR,研究发现盐酸安罗替尼可显著抑制Cal27-2C5-EIF5A2细胞的体外迁移及侵袭能力（P＜0.05）,但对Cal27-2C5-VECTOR细胞的体外迁移及侵袭能力没有显著的影响（P＞0.05）。9.盐酸安罗替尼可以调节周期和凋亡相关蛋白的表达水平。10.盐酸安罗替尼可调节EMT相关蛋白的表达水平。结论1.盐酸安罗替尼能够抑制OSCC细胞系（Cal27、Cal27-2C5）的体外存活、克隆形成、迁移及侵袭,诱导细胞周期阻滞在G2/M期,促进细胞发生凋亡,下调Cal27细胞中EIF5A2的表达水平,并可显著抑制EIF5A2过表达细胞的迁移及侵袭。2.盐酸安罗替尼抗口腔鳞状细胞癌细胞系的相关作用可能是通过下调EIF5A2及抑制EMT而实现的。
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