鳙鱼(Hypophthalmichthys Nobilis)促性腺激素基因的克隆、表达和序列分析

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促性腺激素(Gonadotropin Hormone,GTH)是由脊椎动物垂体前叶细胞合成和分泌的一类糖蛋白激素,主要生理作用是刺激生殖细胞的生长、发育、成熟、排精及排卵。在哺乳动物中促性腺激素有两种,即促滤泡激素(Follicular Stimulating Hormone,FSH)和促黄体生成素(Luteinizing Hormone,LH)。它们都是由α和β两个亚基组成,其中α在两种激素中是相同的,而LHβ和FSHβ不同。在鱼类中,存在两种类型的促性腺激素,GTHⅠ和GTHⅡ,通过分析两种GTH的化学结构、生物活性,一般认为GTHⅠ和GTHⅡ分别对应于哺乳动物中的FSH和LH.本研究通过RACE技术从鳙鱼(Hypophthalmichthys nobilis)脑垂体中克隆出GTHα亚基和两种促性腺激素β亚基,分别是促黄体素亚基(Luteinizing Hormone,LH)和促滤泡激素亚基(Follicle-stimulatingHormone;FSH)。其中GTHα亚基cDNA全长839bp,由433bp的3’UTR组成,开放阅读框为356bp,编码118个氨基酸(GenBank序列登录号:EU095937),第1-23个氨基酸为信号肽,第24-118个氨基酸为成熟肽。鳙鱼FSHβ亚基cDNA全长645bp,由130bp的5’UTR,由118bp的3‘UTR组成,开放阅读框为396bp,编码131个氨基酸(GenBank序列登录号:EF552360),第1-23个氨基酸为信号肽,第23-131个氨基酸为成熟肽;LHβ亚基cDNA全长559bp,由114bp的3’UTR组成,开放阅读框为444bp,编码147个氨基酸(GenBank序列登录号:EF565164),第1-31个氨基酸为信号肽,第32-147个氨基酸为成熟肽。根据鳙鱼与草鱼等鱼类及其它脊椎动物GTHα、FSHβ和LHβ亚基的氨基酸序列分析表明:在鱼类中GTHα,LHβ,FSHβ亚基具有高度保守性,(GTHα70%-99%、LHβ53%-97%、FSHβ38%-93%),但是FSHβ亚基分化更快.用β-actin内参法从鳙鱼的垂体、下丘脑、心脏、肝脏和性腺等不同的组织,提取总RNA,用RT-PCR技术分析得出鳙鱼FSHβ和LHβ基因仅在垂体中特异性表达。利用蛋白分析软件ANTHEPROT5.0对FSHβ、LHβ、GTHα亚基进行分析,结果表明,FSHβ蛋白的分子量为14.7KDa,LHβ蛋白的分子量为16.5KDa,GTHα蛋白的分子量为14.7KDa。二级结构分析表明FSHβ主要是β-转角,LHβ是β-转角和β-折叠为主,GTHα主要是α-螺旋和β-转角。
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