玉米GRAS转录因子基因ZmSCL14功能分析

来源 :山东农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xingxingshuaige
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动植物的重要区别之一是植物可以借助根系固着于土壤中,并且根系还是植物吸收以及转运水分,无机盐以及其他养分的重要器官。玉米(Zea mays L.)作为主要粮食作物对国民经济发展有着主要作用。鉴定、挖掘玉米中的根系农艺性状相关新基因并研究其调控机理,这对于玉米新品种的选育具有战略性的意义。前期,我们从实验室现有的玉米转基因的Ds插入突变体库进行表型筛选分析,筛选到一个Ds插入基因外显子内的短根突变体zmscl14-1,通过序列分析,发现该基因属于转录因子GRAS家族LISCL亚家族,在玉米中未有人研究报道。我们将其突变基因命名为ZmSCL14,后续我们以ZmSCL14基因为主要研究对象对其功能进行研究分析。(1)为了确定突变体基因的准确性,我们购得一个因EMS诱变导致翻译提前终止的等位突变体zmscl14-2。通过对两个等位突变体的表型分析,我们发现zmscl14突变体表型主要为幼苗时期主根较短,并且主根上具有较多侧根的分布,而到成苗期节根发育出现缺陷,导致总根系变小。可能由于zmscl14-2突变导致终止位置较为靠前,所以zmscl14-2突变体表型稍显严重,植株个体与野生型相比较zmscl14-2更为矮小。zmscl14突变体其它发育过程未观察到明显变化。(2)对玉米不同发育时期的各组织进行取材,进行定量PCR分析,表明ZmSCL14基因各器官均有表达,但是在玉米幼嫩器官表达量较高。与此同时,我们利用PEG6000、Na Cl及NAA等多种激素处理野生型玉米,并分别在0h、1h、3h、6h、12h、24h这六个不同时间段取材,以进行q RT-PCR分析,分析结果显示该基因对PEG6000、Na Cl以及NAA响应强烈,暗示ZmSCL14基因参与了植物对内部激素和外部逆境信号的调控。(3)由于该基因对胁迫处理PEG6000响应强烈,于是我们利用PEG6000模拟干旱处理,我们发现zmscl14-1的萌发较WT受到严重影响。自然干旱条件下,zmscl14-1幼苗同样表现出较WT对干旱更为敏感。为了进一步验证该基因是否参与玉米抗旱调控,我们构建了Ubi::ZmSCL14载体并转化二穗短柄草,干旱分析显示,ZmSCL14过表达株系耐旱性显著提高。同时我们利用CRISPR/Cas9技术获得BdSCL14的功能缺失突变体,干旱分析研究显示bdscl14突变体也表现出对干旱胁迫的超敏感性,这些结果表明SCL14基因可能是禾本科植物参与干旱逆境胁迫的普遍基因。(4)zmscl14-1与野生型玉米中的胁迫相关基因进行荧光定量分析表明胁迫相关基因诸如:ZmRD20、ZmNH3等基因表达量较WT显著下降,与干旱分析表型结果一致。(5)同样我们对ZmSCL14过表达二穗短柄草与野生型二穗短柄草中的抗氧化相关基因以及胁迫相关基因进行荧光定量分析,分析结果显示抗氧化相关基因诸如:BdFe-SOD、BdAPX1、BdCAT二者之间无明显差异,而胁迫相关基因诸如:BdCBF1、BdCBF2、BdWRKY36的表达量较WT显著上调,与干旱分析表型结果一致。(6)通过构建35S::ZmSCL14-GFP载体并瞬时侵染烟草观察其亚细胞定位,我们发现该基因于细胞核有定位。(7)二穗短柄草中过表达ZmSCL14基因发现过表达植株耐旱性显著提高的同时,我们还发现过表达植株较野生型严重晚花,从而造成过表达植株营养生长旺盛,分支及穗分支较WT多,但种子较小的表型,对开花相关基因的q RT-PCR分析结果显示可能是BdVRN1的显著下调造成过表达植株晚花。通过以上研究表明,我们在玉米以及禾本科模式植物二穗短柄草中研究证实SCL14基因参与了植物根系发育,并且是植物应对干旱胁迫的重要调节基因。
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