粪肠球菌是人和动物肠道内的正常菌群之一,为一种重要的条件致病菌,常作为细菌耐药性的“指示菌”。随着抗菌药物在畜牧业生产中的广泛使用,使得粪肠球菌对不同抗菌药物的耐药性呈逐年上升趋势,使其临床治疗变得棘手。同时,关于粪肠球菌耐药机制的研究,以及整合子是否已经参与到粪肠球菌多重耐药性的传播中,已经成为亟待解决的关键问题。为此,本研究以动物源粪肠球菌作为对象,采用常规微生物学结合分子生物学方法,对分离株进行鉴定,筛选多重耐药菌株,检测分离株中I类整合子的携带,查明其可变区所携带的耐药基因盒,初步分析其参与传播粪肠球菌多重耐药性的机制,为控制粪肠球菌耐药性的传播提供理论依据。1.动物源粪肠球菌的分离、鉴定采用常规微生物学方法,对194份动物源粪便及肛拭中的可疑肠球菌进行分离纯化,对其形态学特性、培养特性、生理生化特性和分子生物学特性进行鉴定,共分离鉴定到285株粪肠球菌,其中猪、牛、羊、马、鸡和蜣螂源粪肠球菌分别为49株、20株、174株、17株、21株、4株。2.动物源粪肠球菌耐药表型及基因型的检测采用CLSI(2014年)推荐的K-B扩散法,选择8种临床常用抗生素,检测分析285株粪肠球菌的耐药表型及多重耐药性。结果表明:285株粪肠球菌对青霉素的耐药率最高为92.28%,其次是链霉素82.11%、阿莫西林64.91%、红霉素54.04%、四环素45.26%和环丙沙星40.00%,对呋喃妥因、氨苄西林表现为高敏。其中有265株表现出多重耐药,5重耐药粪肠球菌占31.39%(91/285),6重耐药占26.67%(76/285)和4重耐药占15.09%(43/285),7重耐药及其以上耐药占7.02%(20/285)。285株粪肠球菌对9种耐药基因的PCR检测结果表明,β-内酰胺类耐药基因tem检出率最高达77.89%,其次是四环素类tetM基因为33.68%,喹诺酮类gyrA基因为37.54%和ParC34.74%。氨基糖苷类耐药基因以aph(3’)-III基因检出率最高为22.46%,其次是aac(6’)/aph2’’基因为10.88%和ant(6’)-I基因为8.42%,未检出mef A基因。3.动物源粪肠球菌多重耐药性与I类整合子的相关性研究采用PCR检测结合序列分析的方法,对分离株中携带的I类整合子及其耐药基因盒进行检测。结果表明,265株多重耐药粪肠球菌的I类整合酶intI基因的阳性率为36.60%,3′-保守端qacE△1-sul 1基因检出率为71.13%,扩增出31株耐药基因盒插入区,检出率为31.96%,31株均携带有aadA2编码氨基糖苷类耐药基因盒,其与氨基糖苷类药物的耐药表型与基因型(aph(3’)-III、aac(6’)/aph2’’、ant(6’)-I)具有高度相关性,但并非唯一因素,未发现与其他抗生素耐药机制相关的基因盒。研究结果表明,石河子周边地区动物源粪肠球菌多重耐药性现象较为严重,I类整合子已经参与到其耐药基因的传播中。研究结果揭示本地区畜牧生产中应加大对动物源细菌耐药性的监测,以避免I类整合子通过动物源产品将耐药基因在动物与人之间传递。