第一部分Bcl-2、survivin基因多态性与甲状腺乳头状癌发病风险的关系背景及目的：甲状腺癌是最常见的内分泌系统恶性肿瘤,甲状腺乳头状癌(Papillary thyroid carcinoma PTC)是其中最常见的一种,约占所有甲状腺癌的65%-75%,调查发现全球甲状腺癌发病率以每年4%的增幅上升,乳头状甲状腺癌的发病率升高是其主要原因。然而其发病机理却仍不明确,因此非常有必要开展对于甲状腺癌的发病机制的相关研究。目前研究发现,细胞凋亡失衡与肿瘤发病有关,而参与细胞凋亡调控的凋亡相关基因亦与肿瘤有显著相关性。除此之外,已发现多种基因的多态性会参与疾病的发生与发展。Bcl-2基因、survivin基因是目前发现的作用较强的凋亡抑制基因,已有研究报道bcl-2及survivin基因多态性与多种肿瘤的发病、转移及预后有关,但与甲状腺癌相关性的研究却罕见报道。因此本研究选取bcl-2基因-938C/A、survivin基因9194A/G多态性位点作为研究对象,探讨其多态性与中国汉族人群甲状腺乳头状癌的发病及临床病理特征的相关性。方法：本研究采用病例对照研究方法,收集滨州医学院附属医院在2008年3月至2010年10月间126例甲状腺乳头状癌患者(PTC组)和198例健康对照者(CON组)作为研究对象,全部病例诊断明确后均行甲状腺癌切除术。两组间在性别、年龄分布、饮酒和吸烟习惯等方面相匹配。收集所有研究对象的外周静脉抗凝血,提取外周血DNA后进行聚合酶链反应(PCR)扩增目的片断、PCR产物纯化后进行DNA测序分析bcl-2基因-938C/A、survivin基因9194A/G多态位点的基因型。采用SPSS13.0统计处理软件,进行率的x2检验,并计算OR值。结果：1.在PTC组和CON组中,bcl-2基因-938C/A多态性位点和survivin基因9194A/G多态性位点基因型频率均符合Hardy-Weinberg平衡。2.Bc1-2基因-938C/A多态性位点：(1)CON组A/A基因型频率显著高于PTC组(25.9%vs18.6%,P=0.04,校正后OR值=0.35)。CON组A等位基因频率明显高于PTC组(49.7%vs40.7%,P=0.029,OR=0.64)。(2)PTC组按不同临床病理特征进行分层后分析发现,只有TNM分期组内基因型分布频率有显著性差异。TNM分期为Ⅰ期+Ⅱ期者,其AA基因型频率明显高于TNM分期为Ⅲ期+Ⅳ期者(30.4%vsl1.1%,P=0.009)。3Survivin基因9194A/G多态性位点：(1)CON组A/G基因型(36.3%)、G/G基因型频率(14.0%)均显著高于PTC组(26.2%、8.2%)(P值分别为0.021、0.039,校正后OR值分别为0.77、0.59)。CON组G等位基因频率明显高于PTC组(32.1%vs21.3%,P=0.003,OR=0.56)。(2)按性别、多中心性、包膜浸润、淋巴结转移分层后分析,PTC组内基因型分布频率差异均无统计学意义。而按年龄、肿瘤大小、T分期、TNM分期进行分层后发现,年龄<45岁、肿瘤<20mm、T分期为1+2期、TNM分期为Ⅰ期+Ⅱ期者,与年龄≥45岁、肿瘤≥20mm、T分期为3+4期、TNM分期为Ⅲ期和Ⅳ期者相比,其GG基因型频率明显增加(15.2%、14.3%、13.3%、14.6%vs3.9%、4.1%、3.2%、4.1%),差异具有统计学意义(P值分别为0.028、0.045、0.042、0.038)。结论：1.Bcl-2基因-938C/A、survivin基因9194A/G多态性均与中国汉族人群甲状腺乳头状癌发病有关。2.Bcl-2基因-938C/A位点A/A基因型、A等位基因,survivin基因9194A/G位点G/G基因型、G等位基因与甲状腺乳头状癌发病风险降低有关,是甲状腺乳头状癌的保护性基因。第二部分甲状腺乳头状癌组织中bcl-2、survivin的表达及其与bcl-2、survivin基因多态性的关系背景及目的：已有研究表明,凋亡抑制基因在多种肿瘤组织中异常表达,且其表达水平与肿瘤的多种临床病理特征及患者的预后有关。而凋亡相关基因的多态性可能通过影响基因的转录和蛋白表达水平而参与多种恶性肿瘤的发生。目前尚未见关于bcl-2、survivin基因多态性与甲状腺乳头状癌组织中bcl-2、survivin蛋白表达水平关系的相关报道。本研究初步发现bcl-2基因-938C/A、survivin基因9194A/G多态性与甲状腺乳头状癌的发病相关。进一步我们将对甲状腺乳头状癌组织中bcl-2、survivin蛋白表达水平进行测定,探讨bcl-2、survivin蛋白表达水平与甲状腺乳头状癌不同临床病理特征之间的关系,及其与bcl-2基因-938C/A、survivin基因9194A/G多态性之间的关系。方法：收集滨州医学院附属医院在2008年3月至2010年10月间126例行甲状腺乳头状癌切除术后患者的石蜡包埋肿瘤组织样本和周围正常组织样本,选取其中对应的血标本bcl-2、survivin基因PCR扩增阳性病人的肿瘤组织样本作为研究对象,应用免疫组织化学方法检测bcl-2、survivin在甲状腺乳头状癌组织和正常组织中的蛋白表达水平。采用SPSS13.0软件,应用卡方检验进行统计分析。结果：1.Bcl-2蛋白在PTC组织中的阳性高表达率为58.5%,在癌旁正常甲状腺组织中不表达或低表达。2.肿瘤≥20mm者(66.2%vs46.8%)、T分期为3+4期(70.0%vs46.6%)、有淋巴结转移(71.4%vs51.3%)以及TNM分期为Ⅲ期+Ⅳ期者(70.8%vs39.1%),与肿瘤<20mm者、T分期为1+2期、无淋巴结转移者、TNM分期为Ⅰ期+Ⅱ期者相比较,其bcl-2阳性高表达率明显增加,P值分别为0.036、0.01、0.034、0.001。3Survivin蛋白在PTC组织中的阳性高表达率为45.1%,在癌旁正常甲状腺组织中为阴性表达。4Survivin阳性高表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、多中心性、T分期及TNM分期无关。有包膜浸润(高表达率78.0%vs22.2%)和淋巴结转移者(高表达率60.0%vs36.4%),其survivin阳性高表达率明显增加,P值分别为＜0.001、0.011。5.Bcl-2基因-938多态位点携带AA基因型的甲状腺乳头状癌组织中bcl-2高表达率(31.8%)明显低于CC基因型者(72.7%和57.7%,P=0.001)。Survivin基因9194A/G多态位点携带AA基因型的甲状腺乳头状癌组织中survivin高表达率(42.5%)与AG和GG基因型者(53.1%和40%)相比无显著性差别(P>0.05)。结论：1.Bcl-2的阳性高表达与甲状腺乳头状癌患者的病情严重程度及不良预后有关。Survivin的阳性高表达与甲状腺乳头状癌的侵袭性、淋巴结转移相关。2.Bcl-2基因启动子区-938C/A多态性影响bcl-2蛋白的表达,AA基因型者甲状腺乳头状癌组织中bcl-2蛋白表达减少。Survivin基因外显子9194A/G多态性不影响survivin在甲状腺乳头状癌组织中的表达。