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在哺乳动物中,雌雄个体之间为了达到X染色体上基因表达量的平衡,雌性个体会在早期胚胎发育过程中将其中一条X染色体失活(X Chromosome inactivation,XCI)。X染色体失活主要由X染色体失活中心(X Inactivation Center,XIC)介导,而位于失活中心的X染色体特异性转录体(X-chromosome inactive special transcript,XIST)在X染色体失活过程中起到主要作用。近年来对XCI失活领域的不断探索,发现了很多XIST的调节子。JPX在2002年被发现,其编码的长非编码RNA是在小鼠胚胎干细胞分化过程中发现的一个XIST的激活子,JPX通过将XIST P2启动子上的绝缘子CTCF游离出来,解除绝缘子CTCF对XIST转录的抑制作用,从而促进XIST的表达,使得XCI正常进行。敲除JPX基因对雌性的胚胎干细胞具有致死性。然而,在胚胎的早期发育中JPX是否也能影响XIST的表达,迄今无相关报道。本研究是在牛的早期胚胎中,采用体细胞核移植技术研究胚胎早期发育中JPX对XIST表达的影响。1、检测牛早期胚胎不同发育阶段中JPX和XIST的表达情况,发现JPX和XIST在牛的2细胞胚胎、4细胞胚胎、8细胞胚胎、桑椹胚和囊胚中都有表达,并且随着胚胎发育相对表达量逐步升高。2、通过QRT-PCR分别检测牛雌雄胎儿心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织中JPX和XIST的相对表达量,发现JPX和XIST在雌性胎儿组织中的相对表达量显著高于雄性胎儿组织(P<0.05)。3、根据NCBI上已知的牛JPX序列通过3’-RACE PCR扩增技术将牛JPX 3’端全长660 bp扩增出来,通过测序获得JPX 3’端全长序列。4、构建针对牛JPX的JPX-pcDNA?6.2-GW/EmGFP-miR干扰载体,QRT-PCR检测到干扰效率为75%(P<0.01),稳转雌性牛成纤维细胞,筛选出单细胞克隆。以获得的单细胞克隆作为供核细胞,进行体细胞核移植,并检测JPX、XIST以及X连锁基因的相对表达量,发现当JPX受到干扰后,相应胚胎时期的XIST表达量显著下降,但三个X连锁基因PGK1、DYNLT3和MSN在囊胚阶段的表达量显著上调。在牛早期胚胎发育过程中,当JPX RNA水平受到干扰后会下调XIST的表达,进而上调X-linked基因PGK1、DYNLT3和MSN的表达。