绵羊梅迪-维斯纳病（Maedi-Visna disease,MVD）是绵羊的一种慢性病毒性疾病,该病病原为梅迪-维斯纳病毒（Maedi-visna Virus,MVV）。目前,缺乏对MVD有效治疗的方法,对于感染MVV的病畜只能进行隔离、扑杀,因此尽早发现和尽早隔离是最为可行的方法。而一种灵敏性高和特异性强的诊断方法对MVV的防控有重要作用,因此本研究开展如下试验:本研究利用DNA Star生物学软件对MVV衣壳蛋白（CA）及MVV跨膜蛋白（TM）的抗原表位进行分析。采用分子克隆技术分别构建p Easy-E1-CA、p Easy-E1-TM及p Easy-E1-CA-TM表达质粒。通过原核表达获得重组CA、TM和CA-TM融合蛋白并制备重组CA和TM蛋白兔源多克隆抗体,经间接ELISA测定效价、经Western blot和免疫组化检测抗体的特异性。以CA-TM融合蛋白为包被抗原建立梅迪-维斯纳病毒间接ELISA检测方法。经特异性、重复性、敏感性及临床应用对其检测效果进行评价。结果表明:本试验成功构建p Easy-E1-CA、p Easy-E1-TM及p Easy-E1-CA-TM表达质粒。SDS-PAGE结果显示重组CA蛋白以可溶形式表达,其分子量约为27k Da;重组TM蛋白以包涵体形式表达,其分子量约为14 k Da;重组CA-TM融合蛋白以包涵体形式表达,其分子量约为40 k Da。制备的重组CA和TM蛋白兔源多克隆抗体效价分别为1∶8192和1∶4096。Western blot结果显示制备的兔源多克隆抗体可以特异性识别MVV CA蛋白和MVV TM蛋白。免疫组化显示在自然感染MVV的病肺组织中可见肺泡腔内浸润的巨噬细胞内有明显棕黄色阳性信号。本试验成功建立的梅迪-维斯纳病毒间接ELISA方法。特异性结果显示本试验建立的检测方法不能检测除MVV以外的如口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus,FMDV）、绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae,MO）等绵羊常见病原,且既能识别病畜体内产生的抗CA蛋白抗体也能识别病畜体内产生的抗TM蛋白抗体;敏感性结果显示该ELISA检测方法最低可检测出16000倍稀释的阳性血清;该ELISA检测方法重复性结果显示变异系数在2.3%-8.5%;对课题组长期跟踪的病羊群中采集的69份疑似病例血液样品检测结果显示,该ELISA方法检测出31份阳性样品,38份阴性样品;ID Screen MVV/CAEV Indirect试剂盒检测出37份阳性样品,32份阴性样品。经对比本试验建立的ELISA检测方法与ID Screen MVV/CAEV Indirect试剂盒阳性符合率为83.7%,阴性符合率为100%,整体符合率为91.3%。综上,本试验成功建立梅迪-维斯纳病毒间接ELISA检测方法。该方法不仅减少了因为血清转换导致血清学检测不准确的影响,同时增大了检测范围,不仅对MVD的防控、监测及公共卫生有重要的意义,而且为内蒙地区MVD的诊断及净化提供了方法。