玉米ZmLTP3基因的生物学功能鉴定及启动子克隆分析

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研究表明植物转脂蛋白(lipid transfer proteins,LTPs)参与多种生物学过程,但在非逆境胁迫下的作用鲜有报道。本研究将玉米中一个转脂蛋白成员——ZmLTP3基因的正义链和反义链分别连接上表达载体再利用花粉管通道法转入到玉米品种2416中,验证其生物学功能。同时克隆ZmLTP3基因的上游启动子序列(1302bp),并连接表达载体转化拟南芥,通过GUS染色验证其是否具有启动子活性。明确其上游调控机制。研究结果表明:1.干旱胁迫下过量表达ZmLTP3基因的玉米株系生理生化指标都优于对照,随着干旱处理时间的延长,转基因株系株高、茎粗、叶面积、侧根数、根长、鲜重、干重、三个保护酶(SOD、POD、CAT)活性、叶绿素含量都显著高于对照。MDA的含量和外渗电导率显著低于对照,复水后仍有差异;高盐胁迫下过量表达ZmLTP3基因的玉米株系生理生化反应也均优于对照,随着高盐处理时间的延长,转基因株系株高、茎粗、叶面积、侧根数、根长、鲜重、干重、三个保护酶(SOD、POD、CAT)活性、叶绿素含量都显著高于对照,MDA的含量和外渗电导率显著低于对照。反义表达在干旱和高盐胁迫下转基因株系与对照差异均不显著。2.用PCR仪克隆启动子序列,连接T载体测序验证,测序结果表明,从设计的上游引物到ATG处只有1302 bp,而不是NCBI数据库中的2492 bp,测序结果用Plantcare在线分析发现在克隆序列中含有CAAT-box、TATA-box等启动子必需作用元件,除此之外还含有众多响应生物胁迫、非生物胁迫的元件。3.将启动子序列与GUS报告基因相连构建植物表达载体,转化拟南芥。转基因拟南芥GUS组织化学染色结果表明,此序列具备启动子活性。
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