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背景与目的:多种肿瘤组织内存在肿瘤干细胞（CSCs）,肿瘤的增殖、复发转移和耐药等都与CSCs密切相关；因此，以CSCs为治疗靶标可能是控制肿瘤发生发展的有效途径。肝癌是世界上第5大恶性肿瘤，其发病隐匿、放化疗不敏感、术后5年存活率低。近年来的研究结果证明肝癌组织中存在CD133、CD90及OV6等阳性标记细胞，表达干细胞自我更新相关分子如OCT4、 Sox2、Nanog等，具备CSCs生物学特征，有更强的致瘤性和抗化疗能力。因此，深入研究肝癌CSCs分子调控机制对于临床选择特异性治疗靶标非常必要，是克服肝癌术后复发转移的希望所在。ALC1(amplified in liver cancer1)又名Chd1l(chromodomain helicase/ATPase DNA binding protein1-like gene)，是从人肝癌细胞染色体1q21区分离并克隆出的癌基因，编码89KDa的蛋白，含有保守的SNF2_N功能域、解旋酶功能域及Macro功能域，属SWI2/SNF2相关ATP酶超家族，与染色质解链及DNA修复有关。体外实验发现 ALC1/CHD1L阳性表达肿瘤细胞具有干细胞样特征：自我更新能力、高致瘤性、耐药性及多分化潜能，动物实验发现 ALC1/CHD1L对胚胎植入前内细胞群的发育不可或缺，提示ALC1/CHD1L可能与多能性调节有关，但ALC1/CHD1L与肝癌CSCs是否有关目前尚不清楚，本文拟对此进行深入研究，并探讨相关分子机制。 方法: 1．PCR检测肝癌细胞系CHD1L mRNA表达；流式细胞术检测肝癌细胞系中CD133+细胞的百分比。 2．CD133免疫磁珠分选Huh7细胞，CD133-PE、OV6-FITC抗体对分选前后细胞进行标记，流式细胞术检测分选前后Huh7细胞群内CD133及OV6的表达率；细胞免疫荧光标记法检测肝癌Huh7及HepG2细胞中ALC1/CHD1L和OV6的共表达率。 3．qRT-PCR检测ALC1/CHD1L siRNA干扰对肝癌Huh7及HepG2细胞干性相关分子Oct4、Sox2、Nanog、Bmi1、β-catenin表达的影响；MTS实验及平板克隆实验验证ALC1/CHD1L siRNA干扰后对Huh7及HepG2细胞增殖能力的影响。 4．RT-PCR方法检测ALC1/CHD1L siRNA干扰对RAF/MEK/ERK信号通路的影响;Western blot法从蛋白水平检测ALC1/CHD1LsiRNA干扰后MEK/ERK通路相关蛋白及其磷酸化蛋白、干性相关分子OCT4蛋白表达的变化。 结果: 1.肝癌细胞株Huh7、HepG2、SSMC-7721及BEL-7402均有CHD1L mRNA表达，其中Huh7和HepG2细胞CHD1L mRNA表达水平明显高于SSMC-7721和BEL-7402。流式细胞检测结果显示各株肝癌细胞中Huh7细胞CD133+细胞所占百分比最高，与其CHD1L mRNA表达趋势一致。 2.CD133磁珠分选前后Huh7细胞CD133表达率分别为14.52％及73.3%，其中OV6表达率分别为4.95%及52.34%；细胞免疫荧光双标记实验结果显示肝癌 Huh7细胞和HepG2细胞中ALC1/CHD1L与 OV6的共表达率为34.3%及48.34%。 3. siRNA干扰ALC1/CHD1L表达可引起Huh7及HepG2细胞Oct4、Sox2、Nanog、Bmi1、β-catenin等干性相关分子表达下降，与对照组相比差异均有显著性意义。MTS实验结果显示ALC1/CHD1L siRNA干扰后Huh7及HepG2细胞增殖速度与对照组相比明显下降；平板克隆实验结果显示siRNA干扰ALC1/CHD1L表达后Huh7及HepG2细胞克隆体积变小，克隆形成与对照组相比明显减少，差异有显著性。 4.Western blot实验结果显示ALC1/CHD1LsiRNA干扰对MEK和ERK总蛋白水平无明显影响，但p-MEK和p-ERK蛋白水平明显下降；随CHD1L表达下降干性相关分子OCT4蛋白表达也明显减少，与对照组相比差异有显著性。 结论： 1.不同肝癌细胞株CHD1L表达水平有差别；肝癌细胞株CD133+阳性细胞比率与其CHD1L表达水平趋势一致； 2.肝癌Huh7及HepG2细胞中ALC1/CHD1L与干性标记分子OV6共存；siRNA干扰 ALC1/CHD1L表达可显著降低Huh7及HepG2细胞干性相关分子Oct4、Sox2、Nanog、Bmi1、β-catenin的表达； 3. ALC1/CHD1L通过RAF/MEK/ERK信号通路调控肝癌细胞的干性生物学特征。