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鸭传染性浆膜炎和鸭大肠杆菌病是鸭的两种最主要细菌性疫病,两者在临床上发病年龄、症状和剖检变化等及其相似,并常以混合感染的形式出现,发病率和死亡率高。目前发病采取主要药物治疗措施,但因细菌耐药性问题导致治疗效果不佳,而且极易造成药物残留的食品安全风险,因此,采用疫苗防控是必然选择。本实验是在完成“鸭传染性浆膜炎、大肠杆菌病二联灭活疫苗(CZ12株+SH株)”实验室研究的基础上,为优化该疫苗生产工艺开展的研究工作。本实验分四个步骤,分别从培养基筛选、发酵工艺研究、浓缩工艺研究和灭活工艺研究方面进行。1、培养基筛选研究:采用改良马丁汤培养基、TB、酵母肉汤和P-L肉汤四种培养基,对CZ12株和SH株进行增菌培养同步对比试验,分别测定培养后12h、14h、16h、18h、20h、22h和24h培养液中的活菌数。目的是为筛选一种制备简便、成本低廉、增菌效果好的培养基,为鸭传染性浆膜炎、大肠杆菌病二联灭活疫苗(CZ12株+SH株)工业化大生产做准备。结果表明,改良马丁汤培养基和TB的增菌效果均高于酵母肉汤和P-L肉汤培养基,且二者没有明显差异。经改良马丁汤培养基培养,CZ12株在20～24h细菌增殖到最高水平,活菌数可达到5.2×109～8.1×109 CFU/ml,SH株在培养16～20h细菌增殖到最高水平,活菌数可达到9.5×1010～1.4×1010 CFU/ml。因改良马丁汤培养基成本较低、配制简便,确定为该疫苗的生产用培养基。2、发酵培养工艺研究:在5L发酵罐上分别研究了鸭疫里氏杆菌CZ12株和大肠杆菌SH株发酵培养工艺。确定了菌种的接种量为1%,搅拌通气培养,培养基pH值7.2,鸭疫里氏杆菌CZ12株活菌数可达6.0～8.0 ×109CFU/ml,大肠杆菌SH活菌数可达1.2～1.45×1010CFU/ml,确定了两种菌株培养工艺。3、浓缩工艺研究:采用超滤浓缩方法和连续离心沉降法将鸭疫里氏杆菌CZ12株和大肠杆菌SH株培养物浓缩。对采用不同浓缩工艺制备的鸭传染性浆膜炎、大肠杆菌病二联灭活疫苗的物理性状、安全性和免疫效力等方面进行比较,进一步衡量浓缩工艺的可行性。经试验表明,两种方法均可作为规模化生产的浓缩工艺技术。4、灭活工艺研究:将CZ12株和SH株抗原原液、浓缩液,用不同甲醛溶液浓度0.1%、0.3%、0.5%,置37℃下灭活,不同时间分别取样,进行灭活检验。试验结果表明:鸭疫里氏杆菌CZ12株抗原浓缩液用浓度为0.3%的甲醛溶液,37℃作用16h方可灭活完全;大肠杆菌SH株抗原浓缩液用浓度为0.5%的甲醛溶液,37℃作用至16h方可灭活完全。所以,为了保证抗原能灭活彻底,将鸭传染性浆膜炎、大肠杆菌病二联灭活疫苗(CZ12株+SH株)灭活工艺设定为:鸭疫里氏杆菌CZ12株按菌液总量的0.3%加入甲醛溶液,大肠杆菌SH株按菌液总量的0.5%加入甲醛溶液,置37℃灭活24h,每隔2h充分震摇或搅拌一次。