【摘 要】
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目的:构建纤连蛋白1（fibronectin-1,Fn-1）基因敲除小鼠,以探究Fn-1是否通过影响Wnt信号通路调节骨稳态和骨微结构的变化。方法:（1）构建骨髓间充质干细胞特异性敲除Fn-1小鼠模型,通过PCR法鉴定小鼠基因型,获得实验组小鼠（Fn-1fl/fl,Prx1-Cre+）,以同窝阴性小鼠（Fn-1fl/fl,Prx1-Cre-）作为对照组;（2）提取小鼠股骨总蛋白,蛋白免疫印迹实验检
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目的:构建纤连蛋白1（fibronectin-1,Fn-1）基因敲除小鼠,以探究Fn-1是否通过影响Wnt信号通路调节骨稳态和骨微结构的变化。方法:（1）构建骨髓间充质干细胞特异性敲除Fn-1小鼠模型,通过PCR法鉴定小鼠基因型,获得实验组小鼠（Fn-1fl/fl,Prx1-Cre+）,以同窝阴性小鼠（Fn-1fl/fl,Prx1-Cre-）作为对照组;（2）提取小鼠股骨总蛋白,蛋白免疫印迹实验检测目的蛋白及下游相关蛋白的表达情况;（3）MicroCT扫描小鼠股骨松质骨与皮质骨的微观结构,并测定股骨总体骨密度及骨小梁密度等相关指标;（4）取小鼠股骨进行HE染色,免疫荧光实验观察组织病理学改变及组织内目标蛋白和下游相关蛋白的变化情况。结果:（1）成功构建骨髓间充质干细胞特异性敲除Fn-1小鼠模型;（2）与对照组小鼠相比,在实验组小鼠中,成骨相关蛋白Runx2、Alp、Osx、Ocn和整合素蛋白Itgb1高表达（n=3,P<0.05）;（3）在实验组小鼠中,Wnt/β-catenin信号通路被激活,β-catenin蛋白表达水平升高（n=3,P<0.05）;（4）MicroCT结果显示实验组小鼠小梁骨数量增多,空间结构排列紊乱,小梁骨和皮质骨厚度变薄,各向异性程度下降（n=3,P<0.05）。结论:（1）Fn-1在骨髓间充质干细胞中被敲除会引起成骨相关调节因子表达水平升高;（2）Fn-1蛋白表达下降可以激活Wnt/β-catenin信号通路;（3）Fn-1在骨组织中被敲除可能与非承重小梁骨增加,小梁骨和皮质骨厚度变薄有关。
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