经皮冠状动脉介入治疗是现在治疗冠状动脉粥样硬化性心血管疾病的主要方法之一,但其术后3-6个月内高达30%~50%的再狭窄发生率,使再狭窄的机理和防治研究成为该领域的焦点。近年,广泛使用的雷帕霉素和紫杉醇药物洗脱支架已经使再狭窄率降低至10%以下,可是仍存在内皮化延迟、晚期血栓等副作用,所以研发新型、毒副作用小、经济、高效的支架涂层药物尤为重要。再狭窄是多种因素综合作用的结果,包括血管内膜损伤,血管平滑肌细胞迁移及增殖,血栓形成,血管重塑等一系列病理过程,其中,血管平滑肌细胞过度增殖、迁移分泌大量的胞外基质等异常的生物学表现是导致再狭窄发生的主要原因。榄香烯是中国自主研发的非细胞毒性抗肿瘤药物,提取自中草药姜科植物温郁金,具有高效广谱抑制肿瘤细胞生长的作用。前期研究显示榄香烯可以抑制平滑肌细胞迁移和增殖,同时又能抑制血小板的聚集,扩张血管,改善血循环,具有应用于心血管系统,防治再狭窄的前景。脂质体具有长期缓释、主动靶向、高效持续治疗等优点,所以制备榄香烯脂质体有可能成为新型、高效的抗再狭窄支架涂层药物。本文主要研究内容及结果如下:①榄香烯对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响。分离和培养大鼠主动脉原代血管平滑肌细胞;通过细胞计数法研究榄香烯对血管平滑肌细胞增殖的影响;划痕法和小室法研究榄香烯对细胞迁移的影响。结果显示,当榄香烯浓度超过12.5μg/ml时,显著抑制血管平滑肌细胞的增殖和迁移(P<0.05),且作用具有剂量-时间依赖性。随着榄香烯浓度的增加,处理原代血管平滑肌细胞后,细胞铺展面积减小、胞间连接被打断、核质皱缩,形态狭长。②榄香烯对血管平滑肌细胞增殖和迁移的机理研究。流式细胞术检测榄香烯对细胞周期和凋亡的影响;免疫荧光检测榄香烯对细胞骨架F-actin和胞内Ca2+的影响;采用FX-4000T细胞张应变加载系统,对血管平滑肌细胞施加5%牵张幅度的周期性张应变,加载频率为1.0Hz,时间为12h,Inc RNA芯片分析榄香烯对平滑肌细胞增殖相关基因的表达,WB检测加载前后PCNA、P53、Cx43蛋白的量。结果显示,榄香烯能够阻滞细胞于S/G2期,并能促进细胞凋亡,且作用具有剂量-时间依赖性。25μg/ml的榄香烯作用血管平滑肌细胞与对照组比较,细胞排列紊乱、稀疏,形态狭长,且细胞骨架的肌丝变粗、荧光增强。25μg/ml的榄香烯作用血管平滑肌细胞后,平滑肌细胞内游离Ca2+浓度先明显升高1倍再恢复到正常水平。力学加载后,与对照组比较,榄香烯处理组血管平滑肌细胞的基因表达谱中相对无药物处理组有1417个基因表达差异在2倍以上,涉及PPAR、MAPK、Akt、Erk1/2等约34个信号通路,其中P53的表达增加,PCNA和Cx43的表达下降。③榄香烯脂质体缓释涂层的制备及其对血管平滑肌细胞增殖的影响。用乙醇注入法制备榄香烯脂质体;静电电喷制备榄香烯脂质体涂层;液相色谱检测榄香烯脂质体涂层的缓释效果;药物缓释涂层与血管平滑肌细胞共培养,分析对其增殖和周期的影响。实验制备的榄香烯脂质体大小均匀,呈卵圆形。结果表明,在1h、36h、7d、28d时,榄香烯脂质体电喷涂层和榄香烯注射液涂层比较,具有显著的缓释效果(P<0.05)。10μg/mm2、15μg/mm2的榄香烯药物电喷膜与对照组相比较,对VSMC的增殖有明显的抑制作用(P<0.05),且阻滞细胞分裂周期于S期和G2期。综上,榄香烯可以抑制平滑肌细胞的增殖、迁移,阻滞周期,促进凋亡,其作用涉及多种蛋白因子及信号通路。榄香烯脂质体具有缓释效果和抑制平滑肌细胞增殖的作用。本研究为榄香烯作为支架涂层药物在经皮冠脉介入治疗领域的应用提供了一定的实验依据。