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研究背景骨髓增殖性肿瘤(MPN)是一种危害人类健康的血液系统疾病。主要分为真性红细胞增多症(PV),原发性血小板增多症(ET),骨髓纤维化(MF)及慢性粒细胞白血病(CML)。除慢性粒细胞白血病因BCR/ABL融合基因的发现,其病因、发病机制已相对明确外,其他BCR/ABL基因阴性的MPN的病因机制尚不甚明了。近年来,多个分子标志物,如JAK2V617F,JAK2外显子12,MPL515和TET2等相继被发现,这些标志物的发现对于理解MPN的分子发病机制具有重要意义,也有助于对这类疾病的患者进行诊断和治疗。但是,仍有相当部分MPN患者存在诊断困难。有研究表明部分急性髓系白血病(AML)及骨髓增生异常综合征(MDS)患者中存在DNMT3A, NPM1 和 FLT3-ITD基因突变,并且可作为独立的判断预后的指标。近年来,有研究表明,DNMT3A, NPM1 和 FLT3-ITD三种基因突变在动物模型中都有致骨髓增殖性疾病的作用。但到目前为止,MPN患者中DNMT3A, NPM1 和 FLT3-ITD这三种基因的突变情况,其临床意义及其与预后之间的关系还不完全清楚,并且这三种基因突变与JAK2V617F基因突变之间的关系也尚未明确,仍有待进一步研究明确。研究目的了解JAK2V617F, DNMT3A, NPM1 和 FLT3-ITD这四种基因突变在MPN患者中的发生率及分布情况,并研究四种基因突变之间的相互并存或排斥关系；探索JAK2V617F基因突变与疾病临床特征及实验室检查之间的相关性；最后进一步明确JAK2V617F, DNMT3A, NPM1 和 FLT3-ITD基因突变在MPN发生发展中的作用及机制。研究方法选择2011年2月至2012年12月在山东大学齐鲁医院血液科门诊或病房确诊的120例MPN患者和9例MDS/MPN患者作为研究对象,120例MPN患者中男56例,女64例,平均年龄为55岁。其中包括PV 25例,ET 55例,MF 24例,MPN-u15例和慢性中性粒细胞白血病(CNL)1例。提取骨髓白细胞的基因组DNA,用聚合酶链反应(PCR)方法扩增基因组DNA中DNMT3A基因第23号外显子含R882位点的部分片段,NPM1基因第12号外显子及FLT3第11号外显子,然后送山东省农科院测序中心进行双向测序分析。此外,用TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法检测本组患者中JAK2V617F基因突变的情况。收集本组患者的临床与实验室资料,随访患者的疗效及生存情况,并分组进行统计学分析。结果1.120例MPN患者共检出72例JAK2V617F突变,突变率为60%(72/120)；其中PV19例,突变率76%(19/25),ET 33例,突变率60%(33/55),MF 9例,突变率37.5%(9/24),MPN-u 10例,突变率66.7%(10/15)。四组之间的发病率有显著性差异并且在PV组患者中的发病率最高。另外,1例CNL患者也检测到JAK2V617F突变,9例MDS/MPN患者中检测到1例JAK2V617F突变,突变率为11.1%(1/9)。2.72例JAK2V617F突变患者的平均年龄高于野生型。在PV和ET患者中,JAK2V617F突变患者的平均年龄高于野生型,而在MF和MPN-u患者中,未观察到此现象。在年龄小于60岁的MPN患者中,JAK2V617F突变率为46.9%(30/64),明显小于年龄大于60岁的MPN患者的JAK2V617F突变率75%(42/56)。JAK2V617F在男性和女性患者中的突变率分别为57.8%(37/64)和62.5%(35/56),差异无统计学意义,即JAK2V617F的突变与年龄无关。3.JAK2V617F突变型患者的白细胞计数,红细胞计数,血红蛋白水平明显高于野生型患者,而血小板计数在两组之间的差异无统计学意义。4.120例MPN患者中,只有1例MF患者发生DNMT3A-R882突变,PV,ET和MPN-u患者都没有发生DNMT3A-R882位点突变。DNMT3A-R882突变在MF中的发生率为4%(1/24),在MPN患者中的总发生率为1%(1/120)。9例MDS/MPN患者中有1例发生DNMT3A-R882突变,突变率为11.1%(1/9)。而FLT3-ITD 和NPM1基因突变在我们所研究的120例MPN患者和9例MDS/MPN患者中均未检测到。结论：1.中国MPN患者中PV, ET口MF患者JAK2V617F突变率较高,其中在PV患者中突变率最高；且其突变与年龄存在相关性,年龄越大,突变率越高。而突变率与性别无关。在本研究中,JAK2V617F突变阳性组患者的外周血白细胞计数,红细胞计数和血红和蛋白水平要明显高于野生型患者。2.只有1个MF患者和1个MDS/MPN患者发生DNMT3A-R882基因突变,突变率较低。所有患者中均未发现FLT3-ITD及NPM1基因突变,提示这两种基因突变可能未参与MPN的发生发展或作用极小。此外,要除外我们所研究的患者可能存在这三种基因其他位点的突变的可能性,需要更进一步更全面的如全基因组测序等研究来证实。