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小麦是世界产量第二的粮食作物,在人类生活中不可缺少,提高小麦产量是许多国家的重要课题。利用雄性不育使不同品种间的小麦杂交产生杂种优势是其中一个重要途径。 花粉对于雄性配子的形成至关重要,在植物有性生殖过程中发挥重要作用。花粉特异性启动子能够调控花粉的正常发育。了解启动子调控过程,研究植物雄性不育相关基因及形成的分子机制,有助于构建植物雄性不育株系。在此基础上,本论文先分离小麦花粉特异性启动子,再使其表达细胞毒素基因,期望获得小麦雄性不育,达到潜在的应用价值。具体研究过程如下: (1)解淀粉芽孢杆菌中克隆长度为330bp的Barnase基因;小麦基因组中克隆长度为1.4kb的PSG076基因启动子片段,在生物信息学方面分析该启动子的转录起始位点,以及与花粉特异表达相关的作用元件。 (2)构建PSG076::Barnase::Nos嵌合基因。利用pBI121和pMD18-T vector质粒将PSG076和Barnase转入至pUCG载体,构建成p14B表达载体,用于小麦遗传转化研究。 (3)采用基因枪转化技术,将目标载体p14B转入小麦幼胚,经过组织培养获得再生小麦。对成熟小麦进行PCR鉴定,检测到2株Barnase基因阳性的小麦植株。 (4)后续的观察中,阳性小麦植株的种子结实率与普通小麦相比没有明显改变,极有可能是Barnase基因的表达不会引起小麦表型的变化,对其分子水平研究则需进一步分析。 小麦转基因阳性植株的获得为后续深入研究小麦花粉染色、花粉萌发率,以及是否雄性不育提供了重要的材料。