【摘 要】
：
目的:modRNA是细胞治疗中的一项新兴技术。modRNA全称synthetic modified messenger ribonucleic acid（modRNA）,是一项在体外对mRNA（messenger RNA,信使核糖核酸）的核苷酸进行化学修饰,以逃避机体固有免疫而表达目标蛋白的技术。但目前modRNA体内转染效率低下,无法高效表达目标蛋白,缺乏有效的载体而限制了其应用。针对modRN
【基金项目】
：
国家自然科学基金（资助号:81670372）；
论文部分内容阅读
目的:modRNA是细胞治疗中的一项新兴技术。modRNA全称synthetic modified messenger ribonucleic acid（modRNA）,是一项在体外对mRNA（messenger RNA,信使核糖核酸）的核苷酸进行化学修饰,以逃避机体固有免疫而表达目标蛋白的技术。但目前modRNA体内转染效率低下,无法高效表达目标蛋白,缺乏有效的载体而限制了其应用。针对modRNA缺乏有效载体的问题,探讨电转方法用于modRNA转染细胞的可行性以及筛选出不同细胞电转所需的最适电压和脉冲时间。方法:（1）筛选电转EGFP modRNA入人成纤维细胞最佳的电压和脉冲时间参数,同时收集modRNA的代谢数据;（2）在此基础上,使用最适电压和脉冲时间分别对人成纤维细胞转染nGFP/EGFP+mCherry/VEGF modRNA;（3）利用Hela,293T,3T3三种常见的贴壁细胞,探究电转方法转染modRNA的效果;（4）使用电转法向人/兔外周血来源的悬浮的单个核细胞转染EGFP modRNA。结果:（1）人成纤维细胞电转modRNA的最适电压为440V,最适脉冲时间为30ms;（2）nGFP在电转后6小时即可观察到核内绿色荧光;EGFP+mCherry在电转后8小时可观察到细胞内绿色荧光和红色荧光;VEGF在电转后可表达目标蛋白并且在外周培养液中可检测到VEGF的存在;（3）Hela、293T、3T3细胞电转最适电压分别为425V、400V、440V,最适脉冲时间均为30ms;（4）人/兔外周血来源的悬浮的单个核细胞的最适电压分别为840V和860V,最适脉冲时间均为20ms。结论:本实验证明了（1）电转法转染modRNA进入细胞的可行性;（2）可同时将两种modRNA导入同一个细胞内;（3）最适电压和最适脉冲时间需根据不同的细胞种类分别筛选。
其他文献
地方政府作为公共安全事件的直接负责部门,其危机应对能力和危机处理能力关系到社会的稳定、民众对政府的满意度和信任度,所以必须优化危机传播路径与机制,应对风险社会中频繁发生的公共安全事件。本文以风险社会为背景,以上海外滩踩踏事件、山东非法疫苗事件和白银景泰山地越野马拉松事件为案例,通过案例分析法和问卷调查法对地方政府应对公共安全事件危机传播进行研究。主要研究的问题有两个,第一,地方政府应对公共安全事件
党的十八大以来多次强调文化自信,明确指出文化自信是更基本、更深沉、更持久的力量。发展好文化旅游产业,是我们守住先进文化之根、传承优秀文化之魂、增强文化自信的举措。因此积极重视与切实弘扬具有代表性的中华优秀传统文化是当今一项重要任务。杨家将文化是中华民族文化中标志性的案例之一。在中华历史的长河中奔涌千年,源源不断的散发勃勃生机。神木市是杨业的故乡,是杨家将的故里,这是全国各地杨家将文化传播地所没有的
黄河流域是我国重要的生态发展高地和重要的经济地带,其整体发展水平相较于京津冀、粤港澳、长三角地区而言相对落后。2019年黄河流域生态保护和高质量发展上升为重大国家战略,助推了流域各地区进一步发展。流域当前经济发展相对落后、生态环境面临严峻挑战,分析其原因主要是由于过去的经济发展模式粗放,导致高端产能相对不足,低端产能过剩。为了进一步推动当前经济社会的高质量发展,可以以制造业与生产性服务业之间“双轮
随着互联网在各年龄段人群的快速普及,越来越多的人加入到了社交平台和电商购物行列,人们在网络上交流的同时留下了大量的观点和评论,这些带有主观情感态度的网络文本对于消费者而言可以作为消费决策的依据,因此文本情感分析应运而生,方面级情感分析以判断评价实体所对应的情感极性为主要任务,根据这些情感极性判断产品的满意程度,从而为其他潜在消费者提供参考价值,网络上大量的数据为深度学习的应用提供了长足的动力,也为
“糊弄学”自出现以来,倍受青年追捧和媒体关注,流行于各大社交平台、综艺节目。细微的情绪与宏大的叙事同样值得深思,“糊弄学”不仅是一种网络亚文化现象,还通过其风格折射出社会现实和个体情感的深层结构。作为数字时代青年亚文化的媒介镜像,“糊弄学”反映了青年群体在当下交往过程中对生存面貌和利益的需求,是社会关键转型期背景下青年群体社会心态的重要指向。本文以英国伯明翰学派的青年亚文化经典理论为基础,通过个案
平台经济的快速发展提升了全社会资源配置效率,推动技术变革升级,加快产业向自动化、智能化方向发展。在此背景下,可以调配和管理组织自身及具有互补性服务提供的资源、能力、技术,能够提供全面的供应链解决方案的第四方物流（4PL）企业开始向平台化转型,一些新兴的4PL平台相继出现,如菜鸟网络等。4PL平台本质上是利用数据来驱动第三方物流公司间协作的平台,它具有全产业链优势,能够保证平台的双边客户拥有大量资源
就当今世界各国的经济发展经验来说,区域间经济发展总是非均衡的,总有一些区域经济发展较快,而另外一些区域发展较缓慢,长久累积便形成了区际差距。改革开放以来,中国的经济发展获得了令人瞩目的成绩,但是,受地域、资源特性、经济基础、人文条件、经济社会发展程度及实施区域的非均衡发展战略等因素的影响,中国区域经济发展呈现出明显的非均衡态势。目前,已经形成了“创新是引领发展的第一动力”的共识,高新技术产业集聚加
2020年开始,我国视频行业发生巨大变革。一种区别于爱奇艺、优酷、腾讯的长视频和抖音、快手的短视频的新视频类型:中视频出现。中视频的一个突出特点是能够满足受众高密度信息需求以及适度时间的消费中,其发展时间虽然较短,但已经成为视频领域不可或缺的一部分。随着视频行业的发展,各大视频平台都陆续开始在中视频领域进一步寻求突破,成为区别于长、短视频的第三条发展道路。本文研究分为以下四个部分:第一章是绪论,介
伴随着经济一体化迅速发展,中国在全球市场的参与度不断攀升,对外直接投资（OFDI）与出口贸易的关系愈加紧密。对外投资合作大国的地位持续巩固,进一步深化了中国与其他国家的经贸关系,但是否会延长中国出口持续时间,缓解出口企业生存时间短、出口市场不稳定的窘境,则是值得探究的一个问题。本文对中国OFDI对出口持续时间的影响研究具有一定的理论意义,对中国推动OFDI结构优化升级可以提供一定的借鉴。本文基于中
交通基础设施是一种为保证社会生产和居民生活正常运行的公共服务系统,不仅在提供基础服务过程中承担着人力物力互联互通的重要作用,而且与区域产业结构的转型升级形成良性互动。自改革开放以来,我国交通基础设施建设发展迅速,成果显著。但不同地区之间覆盖率差异明显,尤其是东部与中西部地区之间相差巨大。因而一直以来,交通基础设施对区域产业结构转型升级的影响是社会各界持续关注的热点问题。本文依据上述背景并通过研究相