厌氧氨氧化细菌体内铁存储蛋白的纯化和功能研究

来源 :重庆大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jialufeng
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
厌氧氨氧化细菌,在无需碳源或氧气条件下进行厌氧氨氧化,即通过亚硝酸盐作为氧化剂将铵盐氧化转变成氮气,并从中获得能量。成熟的厌氧氨氧化菌体内含有大量的细胞色素,其中大部分位于厌氧氨氧化体内,而铁作为细胞色素重要的组成成分,在厌氧氨氧化菌的功能中发挥重要作用。然而目前对厌氧氨氧化菌中铁作用机制的研究还十分空缺。有研究发现厌氧氨氧化体中存在一些富铁的纳米颗粒,这可能是一种铁存储蛋白,在厌氧氨氧化菌铁代谢系统中起着关键作用。本论文以在厌氧氨氧化菌体内发现的铁存储蛋白(Ks Bfr)为研究对象,对铁存储蛋白的表达,功能以及在体内的调控机制进行了研究,为厌氧氨氧化细菌体内的铁调控系统提供了理论支持。(1)Ks Bfr的体外表达与纯化条件优化。首先基于之前发现的厌氧氨氧化菌的铁储存蛋白(Q1Q5F8),利用生物学方法,构建了含有Ks Bfr的大肠杆菌表达系统。后续对载入Ks Bfr工程菌培养过程中的温度,诱导剂浓度和蛋白纯化过程中缓冲液的成分和浓度进行优化。最终得到纯度较高组装完整的球状铁储存蛋白,其直径约在15-18 nm左右。(2)Ks Bfr的功能作用验证。对含有重组蛋白的工程菌在不同梯度浓度的Fe SO4条件下培养,观察期生长情况,结果显示工程菌在Fe SO4浓度超过5 m M的条件下生长受到抑制。同在2.5 m M Fe SO4的条件下,工程菌的细菌活性高于野生菌,存活率也高出野生菌10%左右。这表明外加的Ks Bfr也可以在大肠杆菌中正常表达并发挥了其铁储存的功能。纯化得到的蛋白单体能够将Fe(Ⅱ)转化为Fe(Ⅲ),表明其存在具有活性的亚铁氧化酶中心。此外,转录组学的分析结果表明,外源置入的铁存储蛋白可能也受到Fur(一种铁离子调控蛋白)的影响,在工程菌中提高了铁存储蛋白的表达量,加快了有关于铁离子转运和代谢的基因表达,升高了对亚铁离子利用的上限,使其免受体内过多铁离子存在所带来的危害。(3)Ks Bfr的生物信息学研究。通过生物信息学技术,用软件预测模拟,更深入的了解了厌氧氨氧化细菌内铁存储蛋白的物理性质和结构特点。结果表明厌氧氨氧化菌的铁存储是一种疏水性的蛋白,蛋白稳定性较强,利用同源建模得到了其24聚体的球壳状结构。亲缘关系分析发现,其与铜绿假单胞杆菌的关系更为接近。对蛋白质的功能活性位点和保守结构进行分析,发现其存在亚铁氧化中心,血红素结合位点和铁氧化通道三个功能结构。
其他文献
工程岩体是非均质的天然地质体,具有各项异性,其内部存在各种节理、裂隙等结构面,裂隙的几何形状及分布特征影响着岩体的力学性能、破裂模式及破裂演化过程。因此,使用红砂岩为试验材料预制含有V型相交双裂隙岩石试样,采用室内试验与数值模拟手段研究相交裂隙岩石试样在剪切荷载作用下的强度特征、破裂模式及裂纹演化过程。获得了以下的结论:(1)通过V型相交双裂隙红砂岩直剪试验,获得峰值剪应力变化特征,发现含有相交裂
学位
互联网时代的到来,降低了信息的存储成本,提高了信息的流动性,一方面便捷了人们的生活,另一方面却在威胁着公民的个人信息安全。在网络社出现的个人信息,一部分是个人自愿公开的,另一部分则是被人披露的,在这种环境下,个人的出行记录、消费记录、发言记录甚至是违法记录都会被轻易的检索出来,并永久性地保存在了网络中。而这些违背信息主体意愿的情况下存续的信息,在没有正当理由的条件下,就应当允许被删除,否则,这些过
学位
继续性合同天然的不确定性使其对于信赖基础尤为强调。继续性合同的任意解除权,旨在保障当事人因信赖基础丧失时退出合同的自由。任意解除权是形成权,其行使并非违约,但出于保护相对人预期的考量,现行立法对任意解除权的行使设定了一定的条件和程序,以中和对相对人的冲击。在这个过程中,信赖基础丧失的判定是司法界和学界都必须回应的焦点。至于继续性合同任意解除权具体的行使条件,《民法典》第563条对不定期继续性合同的
学位
魏晋易代的夹缝环境与时代兴盛的玄学思潮的共同影响,造成了正始诗人阮籍由儒到玄的思想转变。阮籍对传统儒家人格的尊崇及其因特定时期社会秩序破坏导致的儒家人格理想的破产、对逍遥自然人格的追寻及其因现实政治斗争导致的自我异化直接造成了其人格的分裂。阮籍内心儒玄人格的对抗性存在及其任诞之“形”与执着之“心”的焦灼相持,加深了这种分裂。
期刊
<正>《世说新语》有言:“圣人忘情,最下不及情;情之所钟,正在我辈。”魏晋时期,人的个体生命价值被唤醒,那一群肆意洒脱的人,那一群长于思考的智者,真正地活出了至情至性。书中的人物形象气韵生动,跃然纸上。让我们一起走进《世说新语》的人物世界,品品那个时代特有的浪漫与风流。又下雪了。大雪纷飞的日子,一户人家的门半掩着。我推门而进,映入眼中的是一片狼藉。屋的中间有一人横卧在地上。他抬手掩面,衣冠不整,发
期刊
政策扩散,通常被定义为某项新的政策项目经由一定渠道,经过一段时间后在不同区域、层级政府之间进行传播交流的全过程。政策扩散经由上世纪60年代末兴起后经历了半个多世纪的扩展丰富,逐渐形成了较为完整的理论基础和体系框架,目前已经成为政府公共管理和公共政策研究的焦点问题之一。自2004年上海率先展开政府信息公开制度建设以来,十年间各地各级的地方政府迅速采纳此制度并呈现出在全国范围内扩散的现象。作为提高政府
学位
斜拉桥因其具有力学性能好且经济成本低等优点,已在世界各地广泛使用。斜拉索是斜拉桥的主要受力构件,在车辆、风雨等交变荷载作用下极易发生疲劳损伤。近年来,意大利莫兰迪高架斜拉桥就因斜拉索断裂而引发垮塌事故。这主要是由于斜拉索疲劳损伤为脆性破坏,具有突发性、隐蔽性以及随机性强等特点,难以通过传统检测方法进行有效发现。因此,斜拉索的疲劳损伤评估一直是安全评估领域重点关注的内容之一。目前,斜拉索疲劳损伤状态
学位
白蚁-真菌自然共生体系可高效转化木质纤维素类生物质,其本质在于对木质素物理结构的破坏和官能团的修饰,增强纤维素酶对纤维素的可及性,减少木质素对纤维素酶的非生产性吸附,从而提高酶解糖化效率,为木质纤维素类生物质高效能源化利用提供新思路。白蚁-真菌自然共生体系内白蚁肠道的漆酶(Laccase,简称La)和蚁巢内的蚁巢伞菌(Termitomyces sp.,简称Te)对木质素具有降解效果。基于此,本文提
学位
转子系统广泛存在于各领域的旋转机械当中,例如汽轮机、涡轮机和发电机等。在旋转机械工作时,转子系统不良的振动会减少旋转机械疲劳寿命,甚至可能导致机械零部件破坏失效而引发安全事故。轴承作为转子系统关键的支承部件,其误差与尺寸设计参数显著影响转子系统的振动特性。由于不平衡质量与陀螺效应影响,转子自身会发生弯曲变形,转子系统各部件振动响应出现差异,而目前刚性转子模型难以研究转子各部件振动特性,因此开展多自
学位
作为企业最核心的战略决策之一,企业资源配置决策对企业的生存发展有着举足轻重的战略意义。根据经济人假设,企业家利用有限的资源尽可能最大化个人收益似乎是必然之举,然而现实中部分企业在资源配置决策上却表现出强烈的社会导向。已有研究表明企业家个体认知和价值偏好是影响企业战略选择的关键因素,而早期成长经历和文化熏陶会对其价值认知系统产生深刻的烙印。本文认为,儒家文化作为中国社会影响最为广泛和深远的社会规范,
学位