目的:BPA是一种在日常生活中广泛存在的环境内分泌干扰物,可影响女性生殖内分泌系统相关疾病的发生与发展。研究发现BPA暴露影响子宫内膜蜕膜化相关分子指标的表达,从而减少小鼠胚胎着床的数量。子宫内膜蜕膜化是胚胎着床的关键限速步骤,在人体中,蜕膜化受甾体类固醇激素的周期性调节,发生一系列分子生物学转变。组蛋白修饰的波动在其中发挥关键的调控作用,调节蜕膜化过程中基因的转录激活或抑制。组蛋白甲基化转移酶MLL1是主要介导H3K4me3修饰的酶,发挥基因转录激活的作用,其在子宫内膜蜕膜化中的功能未知。EZH2介导的组蛋白H3K27me3甲基化修饰,抑制基因的转录激活,已被证实其表达降低参与子宫内膜间质细胞的蜕膜化转变。这两种组蛋白H3K4me3和H3K27me3修饰可在靶基因启动子区共同发挥作用,在功能上相互制衡,维持基因稳态。而组蛋白修饰容易收到外界环境因素或激素水平的干扰,环境内分泌干扰物BPA暴露影响子宫内膜间质细胞蜕膜化相关基因表达的分子机制尚未阐明,这一部分将研究组蛋白修饰异常是否参与BPA影响子宫内膜间质细胞蜕膜化的过程。方法:1)体外培养人子宫内膜间质细胞,用醋酸甲羟孕酮（MPA）和双丁酰环磷腺苷（db-c AMP）联合处理诱导细胞蜕膜化的同时,分别加入0p M、10p M、100p M、1n M、10n M、100n M、1μM、10μM的BPA处理细胞,观察子宫内膜间质细胞的形态变化,同时Western Blot和RT-q PCR检测蜕膜化标志分子HOXA10、PRL、IGFBP-1的表达,以及组蛋白甲基化转移酶MLL1、EZH2蛋白和m RNA的表达水平。2)细胞免疫荧光检测蜕膜化过程中BPA不同浓度（0p M、10p M、10n M、10μM）处理后,细胞总H3K4me3和H3K27me3蛋白的表达水平。3)CHIP-q PCR检测BPA暴露后,蜕膜化关键基因PRL、IGFBP-1、HOXA10启动子区H3K4me3和H3K27me3的表达水平。4)在BPA处理的基础上,加入雌激素受体拮抗剂（ICI 182780）,Western blot检测MLL1、EZH2和HOXA10蛋白的表达变化。结果:1)体外蜕膜化激素诱导使子宫内膜间质细胞形态由长梭形变为钝圆、类似上皮样的细胞。加入10n M或10μM BPA后,细胞未见明显蜕膜化转变,仍保持长梭形,未蜕膜化的细胞形态。在蜕膜化过程中,随着BPA浓度逐渐升高,其对MLL1的抑制作用逐渐增强,MLL1的活性显著降低。同时BPA暴露增加了EZH2的表达,其非活性形式p-EZH2的表达降低。蜕膜化相关基因HOXA10、PRL和IGFBP-1的表达在不同浓度BPA处理后均下调。2)当BPA浓度为10n M和10μM时,细胞总H3K4m3蛋白的荧光强度降低,而细胞总H3K27me3蛋白的荧光强度升高。3)蜕膜化过程中BPA暴露后,HOXA10、PRL和IGFBP-1基因启动子区H3K4me3的修饰水平降低,而H3K27me3的修饰水平升高。4)BPA暴露降低子宫内膜间质细胞中MLL1、HOXA10蛋白的表达,增加EZH2蛋白的表达,而使用雌激素受体拮抗剂ICI 182,780可逆转BPA对MLL1、EZH2和HOXA10的影响。结论:BPA暴露抑制MLL1介导的H3K4me3修饰,增加EZH2介导的H3K27me3修饰,从而使基因的转录倾向于抑制状态,降低蜕膜化相关基因的表达。目的:反复移植失败已成为辅助生殖技术中阻碍妊娠率提高的棘手问题,子宫内膜是否具备良好的容受性接纳胚胎着床是移植成功的重要环节,大量的调控分子和基因表达变化参与到子宫内膜的容受性建立、子宫内膜蜕膜化这一精密调控的过程之中,深入研究子宫内膜蜕膜化的发生机制尤为重要。第一部分的研究发现环境内分泌干扰物BPA暴露可通过调控组蛋白甲基化转移酶MLL1和EZH2的表达,影响子宫内膜间质细胞蜕膜化,说明两种组蛋白修饰酶在蜕膜化过程中的重要意义。已有研究证实EHZ2的表达降低参与子宫内膜蜕膜化的转变过程,但MLL1在蜕膜化作用机制中的研究尚无报道。MLL1主要介导组蛋白H3K4me3修饰,可促进基因的转录激活,其对HOXA基因家族具有广泛的调控作用,HOXA10、HOXA11等基因是子宫内膜容受性的标志分子。MLL1分子上还具有甾体类固醇激素受体结合位点,可能与激素信号的传导有关。MLL1是否在子宫内膜间质细胞蜕膜化和容受性建立的过程中接受甾体激素信号的调控而发挥作用需要进一步研究。这部分将对MLL1在子宫内膜组织中的表达水平,及其在子宫内膜间质细胞蜕膜化中的作用机制进行深入探讨。方法:1)收集反复移植失败（repeated implantation failure,RIF）和正常对照患者增生期和分泌期子宫内膜,利用免疫组化、RT-PCR技术检测内膜组织中MLL1和HOXA10蛋白和m RNA水平的表达。2)培养人原代子宫内膜间质细胞和人子宫内膜间质细胞系,用MPA和c AMP单独或联合处理,检测MLL1、HOXA10、PRL、IGFBP-1、总H3K4me3的表达水平。3)在蜕膜化处理过程中加入MLL1抑制剂MM-102,RTq PCR检测HOXA10、PRL、IGFBP-1表达的变化。4)利用si RNA技术,沉默MLL1的表达,检测蜕膜化过程中PGR及其靶基因Hand2、STAT3、FOXO1、HOXA10 m RNA表达变化。6)Co-IP实验检测蜕膜化过程中MLL1是否作为共同作用因子与ER相互结合。5)CHIP-q PCR实验检测蜕膜化过程中MLL1和ER在PGR基因启动子区ERE/Sp1位点的结合情况,以及沉默MLL1后,对ER在PGR基因ERE/Sp1位点结合情况的影响。结果:1)在正常对照组,分泌期子宫内膜中MLL1的表达与增生期相比增加,而RIF患者分泌期子宫内膜MLL1的表达与增生期相比未见明显改变。RIF患者分泌期子宫内膜MLL1的表达与对照组分泌期相比显著降低。HOXA10与MLL1的表达趋势相似,且分泌期子宫内膜中MLL1与HOXA10的表达呈正相关。2)MPA和c AMP联合处理诱导人子宫内膜间质细胞蜕膜化后,MLL1、HOXA10和总H3K4me3蛋白的表达水平升高,蜕膜化标志分子HOXA10、PRL和IGFBP-1m RNA的表达均显著升高。3)使用MM-102抑制MLL1的功能,可显著抑制子宫内膜蜕膜化相关基因的表达。4)si RNA沉默MLL1的表达,可导致蜕膜化后PGR基因的表达显著降低,并影响PGR的靶基因Hand2、STAT3、FOXO1、HOXA10的表达。5)蜕膜化过程中,MLL1与ER蛋白的结合增加,MLL1可能作为ER的共同作用因子,参与ER对靶基因的转录调控作用。6)CHIPq PCR检测发现ER和MLL1可共同结合于PGR启动子区ERE/Sp1位点位点,而沉默MLL1的表达会降低ER在PGR启动子区ERE/Sp1位点的结合,影响ER对PGR的转录调控。结论:组蛋白甲基化转移酶MLL1可响应蜕膜化激素的诱导,其作为ER的共同作用因子参与调控PGR基因的转录激活,影响蜕膜化过程中PGR信号通路的传导,在子宫内膜间质细胞蜕膜化和内膜容受性建立的过程中发挥关键作用。