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目的:观察瞬时转染特异性siRNA后对人大肠癌细胞HT-29 COX-2的表达,探讨RNA干扰COX-2对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:以人大肠癌细胞系HT-29为研究对象,培养后瞬时转染特异性siRNA, 72小时后用MTT法检测siRNA组、阴性对照组与空白对照组细胞的增殖活性,流式细胞仪分析三组细胞周期分布与凋亡的变化,RT-PCR检测三组细胞COX-2 mRNA表达水平,ELISA测定三组细胞培养液上清PGE2浓度。结果:siRNA组与两对照组相比细胞增殖活性明显受抑制(P<0.01);细胞生长明显减缓,G0-G1期细胞比例增加(P<0.01) ,S期、G2-M期细胞减少(P<0.01),可见明显的凋亡(P<0.01);siRNA组较空白对照组COX-2 mRNA水平下降了76.90%(P<0.01);培养液上清PGE2浓度下降了57.50%(P<0.01);阴性对照组与空白对照组之间差异无显著性(P >0.05)。结论:(1)国内首次采用靶向COX-2的RNAi技术研究沉默COX-2基因对大肠癌细胞增殖的影响;(2)沉默COX-2基因可有效地抑制大肠癌细胞增殖,使癌细胞阻滞于G0-G1期并诱导其凋亡;(3)沉默COX-2基因可望成为大肠癌治疗的新方法。目的:探讨RNA干扰COX-2对大肠癌侵袭的影响。方法:以人大肠癌细胞株HT-29为研究对象,培养后瞬时转染特异性的siRNA,转染48小时后用RT-PCR检测siRNA组、阴性对照组与空白对照组MMP-2 mRNA表达水平,免疫组化法检测三组MMP-2的蛋白表达,Boyden体外侵袭实验进行癌细胞体外侵袭力分析。结果: siRNA组与两对照组相比对大肠癌细胞MMP-2 mRNA有明显的抑制作用,MMP-2蛋白表达显著下降(P<0.01);侵袭实验siRNA组较空白对照组侵袭力下降了54.16%,两者有显著性差异(P<0.01),而两对照组之间差异无显著性(P >0.05)。结论:(1)国内首次采用靶向COX-2的RNA干扰技术研究沉默COX-2基因对大肠癌细胞侵袭能力的影响;(2)沉默大肠癌COX-2基因可有效地抑制MMP-2 mRNA表达,MMP-2蛋白水平下降,肿瘤细胞侵袭能力明显降低;(3)沉默COX-2基因抑制大肠癌细胞侵袭能力的机制之一可能是通过下调MMP-2途径。