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恩诺沙星(enrofloxacin，ENR)是一个动物专用的氟喹诺酮类药物。为了研制恩诺沙星残留快速检测试剂盒，本研究制备了恩诺沙星的多克隆抗体和单克隆抗体，并初步建立其ELISA检测方法。
实验中采用碳二亚胺法和氯甲酸异丁酯法(又称混合酸酐法)分别将ENR和BSA、OVA偶联，合成人工免疫原和包被原，并用FeCl<,3>显色反应和紫外扫描分析对抗原进行初步鉴定。用合成的免疫原免疫6只新西兰白兔，经间接ELISA测定，抗体效价均达1：25.6万以上。用间接竞争ELISA测定血清特异性，选择效果最好的多抗血清进行纯化，纯化后血清效价达到1：128万，纯化抗体蛋白浓度为16.68mg/mL。用纯化的抗体优化了间接竞争ELISA方法，检测恩诺沙星的最佳反应条件：ENR-OVA的最适包被浓度为1：40,000，对应抗体的工作浓度为1：40,000，酶标二抗浓度为1：40,000。利用KCjunior软件对标准曲线进行非线性回归，得到的IC<,50>为12.07ng/mL，标准曲线在1ng/mL～250ng/mL间线性良好，R<2>为0.9941，且该抗体对参与测试的10种同类药物均无交叉反应。
用ENR-BSA免疫原免疫Babl/C小鼠，经间接ELISA测定，小鼠效价均达到1：16,000～1：128,000，对恩诺沙星也有较好的特异性。选择效价和特异性都较理想的小鼠进行细胞融合。采用有限稀释法经过4次克隆，筛选后获得6株分泌抗恩诺沙星抗体的杂交瘤细胞株。对特异性和效价都较好的2D，细胞株进行测定，上清效价在1：10,000以上，且对BSA、OVA无反应，为特异性针对恩诺沙星的。得到的IC<,50>值为17.78ng/mL。2D<,7>制备的纯化腹水效价可以达到1：64万以上。纯化抗体蛋白浓度为3.92mg/mL。用纯化的抗体优化了间接竞争ELISA方法，利用KCjunior软件对标准曲线进行非线性回归，得到IC<,50>为11.96ng/mL，标准曲线在1ng/mL～250ng/mL间线性良好，R<2>为0.9945，且该抗体对参与测试的10种同类药物最大交叉反应率为1.06％。可为试剂盒的进一步研制打下基础。