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目的： 1.从已知具有抗肿瘤作用的有毒中药或中药化合物中筛选出具有抑制不同分子途径人结肠癌细胞作用的药物。 2.研究有毒中药藤黄、斑蝥酸钠和华蟾素对不同分子途径结肠癌细胞的凋亡作用、细胞周期的影响以及相关分子机制。 3.观察藤黄对人结肠癌HCT116细胞建立的裸鼠外科原位移植瘤生长及转移的抑制作用和毒性反应，并对藤黄抗结肠癌作用的的分子机制进行研究。 方法： 1.采用MTT法检测白花蛇舌草、雷公藤、重楼、龙葵、藤黄、天南星、黄药子、华蟾素、斑蝥酸钠及亚砷酸氯化钠对不同分子途径的人结肠癌细胞HCT116（错配修复基因hMLH1突变，微卫星不稳定途径）和SW480（错配修复基因正常，染色体不稳定途径）增殖抑制情况。 2.采用AnnexinⅤ-FITC/PI双染法、流式细胞法、免疫细胞化学染色法检测藤黄、斑蝥酸钠和华蟾素干预后对结肠癌细胞HCT116和SW480的细胞凋亡、细胞周期及凋亡相关蛋白BAX、Bcl-2、MLH1、MSH2、p53的影响。 3.通过外科原位移植能表达绿色荧光蛋白结肠癌HCT116细胞的方法建立裸鼠结肠癌模型。40只模型裸鼠随机分为对照组(G1)，5-氟尿嘧啶组(G2)，10、20mg/kg藤黄组(G3、G4)，每组10只。G1组采用生理盐水灌胃，1次/d;G2组用25mg/kg的5-氟尿嘧啶进行腹腔灌注，3次/wk; G3、G4组分别予相应剂量的藤黄提取物灌胃，1次/d。每天观察受试裸鼠的并发症及死亡情况;2次/wk在体外荧光影像系统下观察移植肿瘤大小并测量裸鼠体质量;实验终点处死所有受试裸鼠在开放荧光系统下观察肿瘤生长及转移情况;切除移植肿瘤进行称体质量。 结果： 1.斑蝥酸钠、华蟾素、亚砷酸氯化钠及藤黄提取物对人结肠癌细胞HCTI16及SW480有不同程度的抑制作用。斑蝥酸钠、华蟾素及藤黄提取物干预HCT116细胞的IC50值分别为1.51±0.01 ug/mL、1.96±0.71 ug/mL和1.75±0.13 ug/mL，与干预SW480细胞的IC50值（2.16±0.04ug/mL，29.38±3.78ug/mL，3.125±0.70ug/mL）比较差异有统计学意义(P＜0.05)，亚砷酸氯化钠干预HCT116细胞和SW480的IC50值分别为3.32±0.39ug/mL和3.14±0.21 ug/mL，比较差异无统计学意义（P＞0.05）。白花蛇舌草、雷公藤、重楼、龙葵、天南星、黄药子这6种中药的提取物未显示出明显的抑制作用。 2.藤黄和斑蝥酸钠对HCT116细胞有明显的促凋亡作用，随着干预浓度的递增，细胞凋亡率逐渐增加，与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);3.125ug/ml华蟾素对HCT116细胞有明显的促凋亡作用，与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。藤黄、斑蝥酸钠和华蟾素干预后HCT116细胞G2期细胞所占比例与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);当藤黄浓度达2.5ug/ml时，S期细胞所占比例与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。藤黄、斑蝥酸钠和华蟾素干预后HCT116细胞的BAX、MLH1、MSH2、p53蛋白表达明显上调，Bcl-2蛋白表达明显下调。藤黄和斑蝥酸钠对SW480细胞有明显促凋亡作用，随着干预浓度的递增，细胞凋亡率逐渐增加，与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);各干预浓度的华蟾素均未对SW480细胞产生明显的促凋亡作用。藤黄和斑蝥酸钠干预后SW480细胞G2期细胞所占比例与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;华蟾素干预后SW480细胞周期进程无明显的改变。藤黄、斑蝥酸钠和华蟾素干预后SW480的BAX、MLH1、MSH2、p53蛋白表达明显上调，Bcl-2蛋白表达明显下调。 3.药物干预后，20 mg/kg藤黄组各观察点的平均肿瘤体积(mm3)均小于对照组(d4:104.5±35.5 vs164.1±66.1;d7:102.6±53.8 vs286.2±132.0; d11:137.6±70.5 vs324.4±115.8;d14:207.2±101.7 vs434.2±169.3; d21:229.8±99.8 vs480.4±165.5），差异有统计学意义(P＜0.05)。实验终点20 mg/kg藤黄组的平均肿瘤质量(g)轻于对照组（0.58g±0.26 vs0.92g±0.26），差异有统计学意义(P＜0.05)。20 mg/kg藤黄组与5-氟尿嘧啶组之间比较，10 mg/kg藤黄组与对照组比较，无论是各观察点平均肿瘤体积还是实验终点肿瘤质量差异无统计学意义(P＞0.05)。实验终点开放体内荧光成像显示各组均出现了不同程度的胰腺及淋巴结转移，比较组间淋巴结及胰腺转移率的差异无统计学意义(P＞0.05)。实验过程中各组实验动物均未出现药物相关的不良反应，各组荷瘤裸鼠的平均体质量未出现明显波动。原位移植瘤经20mg/kg藤黄干预后hMLH1基因表达较阴性对照组有明显上调，差异有统计学意义(P＜0.05)，而hMSH2、TGF-β1、IGF-IIR以及PTEN基因表达与对照组比较，差异无统计学差异(P＞0.05)。 结论： 1.藤黄提取物、斑蝥酸钠、亚砷酸氯化钠及华蟾素可有效抑制不同途径的人结肠癌细胞的生长，其中藤黄提取物、斑蝥酸钠、华蟾素可能具有特异性抗微卫星不稳定途径结直肠癌的作用。 2.藤黄、斑蝥酸钠对HCT116细胞和SW480细胞有明显的促凋亡作用，呈浓度依赖性，其机制可能和调节BAX、Bcl-2、MLH1、MSH2与p53蛋白的表达，产生G2/M期及S期阻滞有关。华蟾素对HCT116细胞有明显的促凋亡作用，其机制可能和调节BAX、Bcl-2、MLH1、MSH2与p53蛋白的表达，产生G2/M期阻滞有关。 3.藤黄在达到一定干预剂量（20 mg/kg）后能安全有效地抑制错配基因突变人结肠癌HCT116细胞裸鼠原位移植瘤的生长，作用和5-氟尿嘧啶相似。这种抑瘤作用可能和上调错配修复基因hMLH1的表达有关。