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高温是主要影响鸡免疫力和生产性能的外界应激源之一。鸡在夏季高温条件下，其免疫力和抗病能力会降低、减少进食、减慢生长发育、内分泌功能异常、死亡率提高，严重影响家禽集约化生产并造成经济损失。因此，寻找在热应激下抗病力强的鸡成为了鸡育种工作者有待解决的问题。所以本研究以SPF鸡为实验材料，设置未免疫未热应激组、免疫未热应激组和免疫热应激组，取各组中的脾脏和法氏囊进行RNA-seq，通过分析找到调控鸡热应激条件下影响抗原递呈的关键基因，并在细胞水平上对其进行功能验证，主要结果如下：
1.鸡免疫后的抗体水平极显著高于未免疫（P<0.01），高温会使鸡明显表现出呼吸急促、H/L值和皮质酮都极显著升高（P<0.001）以及CD4+/CD8+极显著降低（P<0.001），表明鸡免疫和热处理成功且热应激会使免疫力会降低。
2. GO富集分析表明脾脏在免疫后与免疫相关的差异表达基因有6个（FGG、IGSF11、ALDOB等）；脾脏在热应激后与免疫和热应激蛋白相关的差异表达基因有15个（GZMA、DUSP1、HSPA5等）。KEGG pathway分析表明脾脏免疫后差异基因显著富集于补体和凝血级联通路；热刺激后差异基因显著富集的生物学通路有趋化因子信号通路和补体和凝血级联通路。两个比对组中的结果显示脾脏在免疫和热应激后与免疫反应和热应激相关差异基因表达变化相反，表明鸡在免疫和热应激作用效果相反。热应激中 DUSP1和 HSPA5显著低表达于非应激组，这两个基因与免疫相关，推断DUSP1和HSPA5的差异表达可能与热应激后免疫有关。
3. GO富集分析表明法氏囊在免疫后与免疫相关的差异表达基因有1个（CD69）；法氏囊在热应激后与免疫和热应激蛋白相关的差异表达基因有3个（COL21A1、CD69和HSP90AB1）。KEGG pathway分析表明法氏囊免疫后差异基因没有显著富集到任何通路；热刺激后差异基因显著富集的生物学通路有突触小泡循环和蛋白质消化和吸收。法氏囊在免疫和热应激后与免疫反应和热应激相关差异基因很少，表明法氏囊不是主要处理该疫苗的场所及对热应激不敏感。
4. HD11能对LPS产生应答，并引起抗原递呈相关基因的表达变化，LPS刺激能显著提高IL1B、IL6、CD1C、CD80/86、TLR4、MHC-I和MHC-II的mRNA表达水平，表明HD11具有抗原递呈功能；LPS刺激HD11能显著提高其表面MHC-II抗体表达，表明LPS能通过MHC-II途径递呈。
5.鸡过表达载体DUSP1转染到HD11，胞内DUSP1的mRNA和蛋白表达水平显著上升且DUSP1的高表达水平并不引起 HD11发生免疫反应；DUSP1过表达后能加强HD11细胞识别结合LPS的能力，提高HD11对LPS的递呈效率，减少HD11递呈LPS的时间。鸡DUSP1的干扰片段转染HD11细胞，胞内DUSP1的mRNA和蛋白表达水平显著降低；干扰DUSP1后能抑制HD11递呈LPS的能力。
6.鸡过表达载体HSPA5到转染HD11，胞内HSPA5的mRNA和蛋白表达水平显著上升且HSPA5的高表达水平并不引起 HD11发生免疫反应；HSPA5过表达后能加强HD11细胞识别结合LPS的能力，提高HD11对LPS的递呈效率，减少HD11递呈LPS的时间。鸡HSPA5的干扰片段转染HD11细胞，胞内HSPA5的mRNA和蛋白表达水平显著降低；干扰HSPA5后能抑制HD11递呈LPS的能力。
综上所述， DUSP1和HSPA5的低表达抑制抗原递呈反应，可能是造成鸡免疫力下降的2个关键基因。
1.鸡免疫后的抗体水平极显著高于未免疫（P<0.01），高温会使鸡明显表现出呼吸急促、H/L值和皮质酮都极显著升高（P<0.001）以及CD4+/CD8+极显著降低（P<0.001），表明鸡免疫和热处理成功且热应激会使免疫力会降低。
2. GO富集分析表明脾脏在免疫后与免疫相关的差异表达基因有6个（FGG、IGSF11、ALDOB等）；脾脏在热应激后与免疫和热应激蛋白相关的差异表达基因有15个（GZMA、DUSP1、HSPA5等）。KEGG pathway分析表明脾脏免疫后差异基因显著富集于补体和凝血级联通路；热刺激后差异基因显著富集的生物学通路有趋化因子信号通路和补体和凝血级联通路。两个比对组中的结果显示脾脏在免疫和热应激后与免疫反应和热应激相关差异基因表达变化相反，表明鸡在免疫和热应激作用效果相反。热应激中 DUSP1和 HSPA5显著低表达于非应激组，这两个基因与免疫相关，推断DUSP1和HSPA5的差异表达可能与热应激后免疫有关。
3. GO富集分析表明法氏囊在免疫后与免疫相关的差异表达基因有1个（CD69）；法氏囊在热应激后与免疫和热应激蛋白相关的差异表达基因有3个（COL21A1、CD69和HSP90AB1）。KEGG pathway分析表明法氏囊免疫后差异基因没有显著富集到任何通路；热刺激后差异基因显著富集的生物学通路有突触小泡循环和蛋白质消化和吸收。法氏囊在免疫和热应激后与免疫反应和热应激相关差异基因很少，表明法氏囊不是主要处理该疫苗的场所及对热应激不敏感。
4. HD11能对LPS产生应答，并引起抗原递呈相关基因的表达变化，LPS刺激能显著提高IL1B、IL6、CD1C、CD80/86、TLR4、MHC-I和MHC-II的mRNA表达水平，表明HD11具有抗原递呈功能；LPS刺激HD11能显著提高其表面MHC-II抗体表达，表明LPS能通过MHC-II途径递呈。
5.鸡过表达载体DUSP1转染到HD11，胞内DUSP1的mRNA和蛋白表达水平显著上升且DUSP1的高表达水平并不引起 HD11发生免疫反应；DUSP1过表达后能加强HD11细胞识别结合LPS的能力，提高HD11对LPS的递呈效率，减少HD11递呈LPS的时间。鸡DUSP1的干扰片段转染HD11细胞，胞内DUSP1的mRNA和蛋白表达水平显著降低；干扰DUSP1后能抑制HD11递呈LPS的能力。
6.鸡过表达载体HSPA5到转染HD11，胞内HSPA5的mRNA和蛋白表达水平显著上升且HSPA5的高表达水平并不引起 HD11发生免疫反应；HSPA5过表达后能加强HD11细胞识别结合LPS的能力，提高HD11对LPS的递呈效率，减少HD11递呈LPS的时间。鸡HSPA5的干扰片段转染HD11细胞，胞内HSPA5的mRNA和蛋白表达水平显著降低；干扰HSPA5后能抑制HD11递呈LPS的能力。
综上所述， DUSP1和HSPA5的低表达抑制抗原递呈反应，可能是造成鸡免疫力下降的2个关键基因。