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研究背景:胆囊神经内分泌肿瘤（Gallbladder neuroendocrine neoplasms,GB-NENs）是一类相对少见的肿瘤,约占整个胆囊肿瘤的2.0-3.0%,占所有神经内分泌肿瘤的0.5%。GB-NENs包括胆囊神经内分泌瘤（Gallbladder neuroendocrine tumors,GB-NETs）与胆囊神经内分泌癌（Gallbladder neuroendocrine carcinomas,GB-NECs）。GB-NECs患者的临床表现常呈非特异性,术前常规检查难以确诊,肿瘤起源不明确,治疗方式尚无定论,总体预后不佳。因此,本研究回顾性分析南京地区三家医院以及SEER（Surveillance,Epidemiology,and End Results）数据库的临床资料,探讨GB-NENs患者的临床病理特征和预后影响因素,以及研究胆囊混合性腺神经内分泌癌（Gallbladder mixed adenoneuroendocrine carcinomas,GB-MANECs）的起源与演化过程,为日后研究有效的临床治疗手段提供方案和一定的理论依据。研究方法:（1）回顾性病案分析自2007年1月1日-2019年12月31日于南京市内的三家医院（南京大学医学院附属鼓楼医院、南京大学医学院附属金陵医院、南京医科大学第一附属医院）确诊为GB-NENs的21例患者,总结GB-NENs的临床资料、影像学检查、实验室检查、手术、病理、治疗及预后等情况;（2）通过SEER数据库收集自1977年至2016年诊断为GB-NENs的448例患者临床资料。采用卡方检验、Fisher精确检验或Wilcoxon秩和检验进行GB-NENs各项临床特征与病理分型的相关性分析;采用Cox回归模型对影响GB-NENs总生存期（Overall survival,OS）及肿瘤特异性生存期（Cancer specific survival,CSS）的各项临床指标进行单因素及多因素分析;采用KaplanMeier方法进行生存分析并绘制生存曲线,评估不同治疗方式对GB-NECs的预后影响;（3）对4名GB-MANECs患者的术后石蜡包埋组织切片（原发灶腺癌成分、原发灶神经内分泌癌成分、癌旁组织、肝或淋巴结转移灶）进行全外显子测序（Whole-exome sequencing,WES）,并对其中1名术后复发患者的肝转移灶进行单细胞转录组测序（Single-Cell RNA sequencing,sc RNA-seq）,采用克隆模型、聚类分析、拟时序分析等生物信息学方法研究GB-MANECs的起源及演化。研究结果:（1）我们在南京地区共纳入21例患者,均为胆囊神经内分泌癌。其中男性8例、女性13例,男女比为1:1.625,发病年龄平均为60.7±8.4岁（44-75岁）,中位患病年龄为61岁。患者均呈非特异性临床表现,主要表现为上腹部疼痛或不适（95.2%）,部分患者伴有恶心、呕吐、体重减轻等症状。患者术前影像学检查及实验室检查多为非特异性。20例患者通过手术,1例患者通过活组织穿刺活检术进行病理学确诊,R0切除率为23.8%。85.7%的患者确诊时已至III期及以上,42.8%的患者出现淋巴结转移,14.3%患者出现肝脏转移。11例患者完成有效随访,总生存期为3-42月,仅1例目前仍存活,一年生存率为27.2%。（2）基于SEER数据库共纳入448例患者,其中胆囊神经内分泌癌300例（67.0%）,胆囊神经内分泌瘤148例（33.0%）。单因素分析显示GB-NENs的年龄、诊断时间、组织学分级、SEER分期、肿瘤大小、有无淋巴结、有无肝转移、是否手术、病理分型与预后有关。多因素Cox回归分析显示年龄、SEER分期、手术治疗、病理分型是GB-NENs的独立预后影响因素。生存分析结果显示手术、化疗、放疗能够改善GB-NECs患者的预后（p＜0.05）,但术后化疗较单独手术不能明显改善其预后（p＞0.05）。（3）GB-MANECs的起源与演化:WES分析结果显示4名患者各样本间均存在共同突变基因,克隆模型提示GB-MANECs的腺癌细胞与神经内分泌癌细胞起源于同一个前体干细胞;sc RNA-seq测序分析结果显示采集的肿瘤细胞可分为高表达神经内分泌癌低表达腺癌基因的细胞亚群（NEC+AC-）、高表达神经内分泌癌高表达腺癌基因的细胞亚群（NEC+AC+）、低表达神经内分泌癌高表达腺癌基因的细胞亚群（NEC-AC+）,通过拟时序分析发现多数NEC-AC+细胞处于模拟分化轨迹的早期阶段,而多数NEC+AC-细胞处于晚期阶段,NEC+AC+处于中间阶段,提示腺癌细胞向神经内分泌癌细胞转分化。研究结论:GB-NENs较少见,其中GB-NECs较GB-NETs多见。GB-NECs恶性程度较高,患者确诊时已至中晚期,并往往出现淋巴结或肝脏转移,手术R0切除率较低。高龄、较晚分期、未行手术治疗的GB-NECs患者预后较差。手术、化疗、放疗能够改善GB-NECs患者预后。GB-MANECs的腺癌细胞与神经内分泌癌细胞为共同起源,且腺癌细胞可向神经内分泌癌细胞转分化。