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真菌多糖具有多种生物功能,是目前生物化学领域研究的热点之一。另外,真菌多糖由于具有结构多样性和良好的吸附能力,还是一类优良的天然高分子材料。固定化酶兼具酶的催化活性和可循环使用性,在化工、临床医药和生物传感器方面有广泛应用。本论文研究了非碱溶性黑木耳多糖的制备及以其为载体固定化纤维素酶,为其进一步的应用开发提供实验依据。 非碱溶性黑木耳多糖的提取采用超声波辅助溶剂浸提的方法,用溶剂将可溶性成分除去,即得到非碱溶性黑木耳多糖。通过单因素试验确定了最佳提取条件为0.1mol/L氢氧化钠溶液、超声波功率为160W、固液比1/100,由正交试验得出的最适提取条件为颗粒度选择d≤0.12mm、温度100℃、时间2h。最终非碱溶性黑木耳多糖得率为49.5%。 采用戊二醛交联法和共价结合法制备了固定化纤维素酶,酶活力分别为游离酶活力的49%和15%。交联法固定化纤维素酶主要分析了交联过程中戊二醛浓度和交联时间对酶活力的影响,确定了最佳交联条件为10%戊二醛室温下交联1h,并研究了固定化酶的pH值稳定性和温度稳定性以及米氏常数和可循环性,发现固定化酶的pH值稳定性和温度稳定性较游离酶有所提高,可重复利用8次以上。对载体多糖进行了丙烯酸接枝,接枝产物作载体时酶活力回收低于交联法固定化酶。 本论文的研究一方面提高了黑木耳的利用价值,另一方面以非碱溶性黑木耳多糖为载体进行的固定化纤维素酶和多糖改性的研究在国内外还未有报道,本课题的研究结果将对固定化酶的制备有一定的参考价值。