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目的本研究建立在大鼠坐骨神经切断损伤后即刻实施神经外膜端-端吻合术及术后早期应用神经妥乐平(NTP)的模型上,通过与对照组对比观察L4-6脊髓神经元形态的改变、尼氏小体的变化、免疫组化检测Bcl-2和Bax表达情况、Tunel染色凋亡细胞计数,以及神经吻合口部位神经纤维的形态学观察,探讨NTP对坐骨神经损伤相应脊髓节段运动神经元的保护作用和NTP是否能够促进周围神经再生,为周围神经损伤后早期应用NTP以促进神经再生提供一些实验性依据,并初步探讨其可能的作用机制。方法114只体重200-250 g的8周龄健康雄性SD大鼠随机分为4组:正常组:6只大鼠,不做任何处理(A组n=6);实验组:共108只大鼠,均在切断大鼠双侧坐骨神经后,即刻实施坐骨神经外膜端-端吻合术。根据术后药物治疗措施,又分为3组,即非治疗组(B组n=36)、神经妥乐平治疗组(C组n=36)、生理盐水治疗组(D组n=36),再按大鼠术后处死时间1d、4d、9d、14d、21d、28d分为6个亚组,每亚组6只大鼠。术毕1h后,对C组大鼠腹腔注射NTP 1.2NU(1ml)/kg·d,D组大鼠腹腔注射NS 1ml/kg·d,两组大鼠均定时定量注射,每天1次直至被处死。B组动物不予药物治疗。处死大鼠后,取L4-6脊髓固定后做HE染色、尼氏小体染色、Bcl-2及Bax免疫组织化学检测、TUNEL染色;取吻合口处坐骨神经固定后行神经镀银染色以观察神经再生情况。结果1大鼠术后行为学表现实验组大鼠与术前相比,都不同程度的出现烦躁不安、食欲减退、体重减轻。在术后观察期间,B组和D组过半数大鼠的双后肢出现跛行、水肿、自残、溃疡深达骨质等表现,而C组与B组和D组两组相比,大鼠出现上述症状的时间较晚、程度较轻,出现者也能较早的恢复。实验组大鼠在4w左右后双后肢的运动功能都有不同程度的恢复。其中C组恢复情况较B组和D组要好,在3w左右表现为能够用双后肢爬行,短时间站立。2脊髓HE染色光镜下,正常组神经元细胞核圆形,呈蓝色淡染,位于胞体中央,核仁明显,胞质内尼氏体明显,均匀分布。实验组神经元细胞核偏位,尼氏小体浓缩、减少,神经元细胞数目减少,从14d亚组开始细胞数目有统计学意义上的差异(P<0.05),C组与B组、D组相比,神经元细胞数目下降较慢。偶可见凋亡细胞散在分布,表现为细胞核致密深染,胞浆淡红色,胞体收缩。3脊髓尼氏小体染色光镜下,正常组尼氏小体清晰,为三角形或椭圆形小块状物质。实验组尼氏小体颗粒数减少、溶解或消失,C组的减少程度略轻于B组和D组。随着观察时间延长,尼氏小体有逐渐恢复的趋势。4脊髓Bcl-2与Bax免疫组化染色光镜下,正常组未见有阳性细胞表达。实验组可见阳性细胞表达,切片通过Hpias-1000病理图文分析系统中的免疫组化分析软件的平均光密度测量分析免疫组化表达强度后,发现Bcl-2和Bax均在9d达到高峰。B组、C组和D组三组相比Bcl-2表达有差异,在9d、14d、21d水平Bcl-2表达有统计学意义上的差异(P<0.05),Bax差异则不明显。C组Bcl-2/Bax值高于BD两组。5脊髓TUNEL染色光镜下,正常组未见阳性细胞,实验组的1d亚组偶可见阳性细胞;其9d亚组阳性细胞数目开始有统计学意义上的差异(P<0.05);其14d亚组阳性细胞达高峰,但是C组的14d亚组阳性细胞数目比B组和D组的14d亚组少,B组和D组的14d亚组组间阳性细胞数目无明显差异。实验组阳性细胞数随观察时间延长而逐渐下降。9d至14d时凋亡速率最高,此时曲线斜率最大。6神经纤维染色从实验组神经纤维镀银染色切片可见:1d、4d、9d三个亚组无神经纤维通过吻合口,且神经纤维排列紊乱。14d亚组开始有小部分神经纤维通过吻合口。C组的21d亚组有部分神经纤维通过吻口,28d亚组有较多神经纤维通过吻合口,但是排列仍不整齐。B组和D组两组28d亚组同C组21d亚组的情况类似,仅有部分神经纤维通过吻口,B组和D组两组间没有明显区别。结论1大鼠坐骨神经切断损伤可诱导脊髓前角运动神经元的死亡,死亡的主要方式是凋亡。2大鼠切断坐骨神经后即刻实施神经外膜端-端吻合术及早期应用NTP既可以一定程度地保护脊髓前角运动神经元避免其过度凋亡,又可以促进损伤的坐骨神经的修复和再生。3大鼠切断坐骨神经后即刻实施神经外膜端-端吻合术后及早期应用NTP可减少脊髓前角运动神经元凋亡的机理,可能与Bcl-2/Bax值增高有关。