白及止血作用、作用机制及止血效价测定研究

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目的:通过白及组分的止血作用及作用机制研究,探讨白及有效组分,并建立一种基于止血效价的生物活性测定方法。  方法:1.白及用95%乙醇回流提取浸膏,浸膏经不同浓度乙醇大孔树脂柱层析分离,分别获得 A、B、C、D组分,剩余药渣水煮、醇沉、Sevag法除蛋白,制备E组分;2.采用小鼠剪尾法对白及不同组分的止血作用及有效组分进行筛选;3.建立大鼠肺、胃出血(BHH syndrome)模型,考察白及止血有效组分对大鼠一般体征、血小板系统、纤溶系统、肺、胃组织病理学的影响,对白及止血作用机制进行研究;4.通过Apyrase酶、P2Y1受体抑制剂(MRS2179)、P2Y12受体抑制剂(2-MeSAMP)、PKC受体抑制剂(Ro-31-8220)和TXA2受体抑制剂(SQ29548)观察白及止血有效组分对大鼠体外血小板聚集、变形以及释放的作用特点和G蛋白偶联受体中ADP受体及TXA2信号通路的影响,探讨白及体外的止血作用机制;5.采用凝血酶时间(TT)的生物活性测定方法,对白及有效组分的止血效价进行评价。  结果:1. C、E组分均能显著缩短小鼠出血时间(P<0.001),其缩短率分别为36.3%、45.7%;2.与模型组比较C、E组分均能使血小板最大聚集率升高(P<0.05),t-PA与PAI-1的比值接近于1(P<0.05),改善肺、胃出血情况;3. Apyrase酶、MRS2179、2-MeSAMP和Ro-31-8220能够特异性的抑制E组分对血小板的诱导作用,SQ29548对血小板聚集无抑制作用;4.凝血酶时间(TT)的生物活性测定方法能通过可靠性检验(偏离直线 P>0.05、偏离平行 P>0.05),仪器精密度(RSD3.84%)、中间精密度(RSD4.57%)、重复性(RSD3.21%)、稳定性(RSD3.67%)良好,不同产地白及止血生物效价为821.93~1187.53 U·g-1。  结论:C、E组分为白及有效组分,白及有效组分能通过改善血小板系统、纤溶系统对肺、胃组织的出血发挥治疗作用,并主要通过对 G蛋白偶联受体信号转导途径中的ADP受体信号通路产生影响,刺激血小板激活,使其聚集、释放、变形而发挥止血作用,且可能与 TXA2信号通路下游分子有关;所建立的白及止血生物效价检测方法可靠,操作简便,重复性好,可用于白及止血生物效价的测定。
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