人溶菌酶外显子顺式重复产生“多中心酶”

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溶菌酶(Lysozyme,EC3.2.1.17),又称胞壁质酶(muramidase)或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶,是英国细菌学家A.Fleming于1922年在鼻粘液中发现的强力杀菌物质,是世界上第一个完全弄清了立体结构的酶.人溶菌酶由四个不同的外显子构成,其中第二外显子是溶菌酶的催化中心.我们通过PCR方法构建了一个新的基因,两个第二外显子通过一段无规卷曲串联,经酶切后定向克隆于pYES2/CT载体中,构建了重组质粒pYES2/CT-aba,转化至酿酒酵母INVScl中,诱导表达目的基因.为了增加aba的表达,该实验所用模板人溶菌酶全基因选用了最适于酶母并被认为适于合成基因表达的密码子.在构建中还删掉了第二外显子中无规卷曲(桥链引物)两端的Cys,并将溶菌酶Cys<77>改为Gly<77>,以减少不必要的配对.当两个第二外显子中的Cys两两与对时,两个第二外显子之间和内部便可形成多个活性中心,从而形成了多中心酶.
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