异种移植是解决临床器官供体短缺的重要思路。目前认为猪是异种移植较为合适的供体，而急性血管排斥反应是异种移植的主要障碍。异种移植物的血管内皮细胞是免疫排斥反应首先攻击的对象，内皮细胞损伤是介导和放大免疫排斥和凝血功能紊乱的关键环节。为研究异种移植中猪动脉内皮细胞损伤、活化机制以及在异种移植中的作用，为保护和延长异种移植物存活时间必需获得猪的动脉内皮细胞，而我国目前尚无成熟的猪动脉内皮细胞株，因此该实验通过胶原酶消化法获取了猪原代主动脉内皮细胞，用携带SV40LT基因的慢病毒转染猪原代主动脉内皮细胞，通过形态学、表面标志物、管状成形能力和免疫学功能对细胞株进行了鉴定，并与原代细胞进行比较，建立了可长期传代且表型稳定的猪主动脉内皮细胞株，该细胞株保持了原代细胞的基本特征，具备一般在体血管内皮细胞的绝大部分功能，为异种移植研究提供了细胞水平研究平台。目的建立猪主动脉内皮细胞株，为以猪为供体的异种移植研究提供必要的细胞水平研究平台。方法1.原代内皮细胞的提取和细胞株的建立：用胶原酶消化法分离猪主动脉内皮细胞，并用携带SV40LT基因的慢病毒转染原代细胞，建立细胞株。2.细胞基本特征鉴定：在形态学上，通过倒置显微镜和电子显微镜分别观察了原代细胞和细胞株的大体形态结构和超微结构；通过MTT法测定了两类细胞的生长曲线；RT-PCR检测了两类细胞中SV40LT基因表达情况；免疫细胞荧光化学法检测了两类细胞表达vWF因子的能力；荧光显微镜下观察了两类细胞吞噬DiI-Ac-LDL的能力；检测了两类细胞在Matrigel基质胶中的管状成形能力。3.免疫学特性检测：RT-PCR测定了两类细胞中α-1,3-GT基因的表达情况；流式细胞术检测了两类细胞中α-1,3-Gal抗原表达情况；两类细胞与人血清共培养后，MTT法检测了人血清对细胞增殖能力的影响；流式细胞术检测了人血清对内皮细胞凋亡率的影响；免疫细胞化学法检测内皮细胞结合人IgG抗体和补体C3、C5b-9的能力。结果1.成功分离和培养了原代猪主动脉内皮细胞，通过倒置显微镜观察细胞呈单层生长，细胞为梭形、椭圆形或不规则形；电镜下细胞表面有绒毛凸起和W-P小体；内皮细胞表达vWF因子并可吞噬DiI-Ac-LDL；内皮细胞具有管状成形能力。2.用携带SV40LT慢病毒成功转染了原代细胞，转染后细胞株高表达SV40LT基因；原代细胞倍增时间约为21h，而细胞株倍增时间约18h；细胞株在形态学、表面标志物、吞噬DiI-Ac-LDL能力以及管状成形能力与原代内皮细胞相似。3.在免疫学特性上，α-1,3-GT基因和α-1,3-Gal抗原在两类细胞内表达无差异（荧光强度分别为（498.2士3.5）和（500.6士3.2），P>0.05），且均高于人脐静脉内皮细胞（P <0.05）。与人血清共培养时，随血清浓度升高，两类内皮细胞的增殖能力下降、细胞凋亡率增加，并均可结合人IgG抗体和补体C3和C5b-（9P>0.05）。结论实验提取的原代猪主动脉内皮细胞具有一般血管内皮细胞的基本形态结构、表型以及功能特征，通过原代动脉内皮细胞转染慢病毒建立的猪主动脉内皮细胞株较好的保持了原代血管内皮细胞的各种特征，并具有和人血清发生免疫反应的能力，具备在体血管内皮细胞的绝大部分功能，可用于异种移植细胞研究。